索拉菲尼联合射频消融治疗肝癌的临床和实验研究

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1、浙江大学博士学位论文索拉菲尼联合射频消融治疗肝癌的临床和实验研究姓名：唐喆申请学位级别：博士专业：外科学指导教师：吴育连20120529浙江人学博士学位论文中文摘要索拉菲尼联合射频消融治疗肝癌的临床和实验研究浙江大学医学院：普通外科学博士研究生：唐酷导师：吴育连教授中文摘要1．研究背景：肝癌目前是世界上第五大致死性癌症。在美国和欧洲，肝癌的发病率正在不断升高，目前已成为肝硬化患者死亡的首要原因。尽管手术切除或肝移植术被认为是治疗肝细胞癌的有效方法，但目前仅有约5％．20％的有临床表现的肝癌患者适于肝脏切除。由于从肝硬化演化而来的肝癌患者的

2、肝功能差及供体肝源短缺等原因导致的肝移植术不能有效实施，因此手术切除仍是治疗肝癌的最佳方法。但，由于残余肝脏不足等原因，肝切除术仍受到限制，特别是对于复发性肝癌和严重肝硬化的肝癌患者。射频消融术是目前治疗肝脏肿瘤过程中应用最广泛的热消融技术，它的优点包括副作用少、恢复快，肿瘤复发后可以再次使用该方法进行治疗等。然而，肿瘤血管中温度相对较低的血流带走热量导致的“热沉效应”限制了射频消融导致的凝固性坏死的范围，并且，肿瘤消融的不完全已成为肝癌治疗失败的一个主要原因。不少研究着力于克服这些影响射频消融疗效的困难，一些研究已经表明降低肿瘤的血流量

3、可以显著地提高射频消融导致的凝固性坏死的效应。动物实验表明，降低肿瘤的血流量可以提高射频消融导致的凝固性坏死的范围，临床研究也表明，通过阻断门静脉或肝动脉的血流可以显著提高射频消融导致的凝固性坏死的范围。由于阻断门静脉或肝动脉的侵入有创性，所以这些方法不便用于临床。Hines．Peralta等人证实三氧化二砷(俗称“砒霜”，具有抗血管生成的作用)可以减少肿瘤内的血流量，增加射频消融导致的凝固性坏死的范围。In浙江大学博士学位论文中文摘要当今索拉非尼已经过随机对照试验，成为了的用于治疗进展期肝癌的常规药物。研究表明，索拉非尼可以阻断数种酪氨

4、酸和丝氨酸／苏氨酸激酶的活性，抑制肿瘤细胞的增殖和促进肿瘤细胞的凋亡。三期临床试验证实了索拉非尼用于治疗晚期肝癌的有效性和安全性，而统计学分析也证实了索拉非尼可显著改善晚期肝癌患者的总体生存率。因此，我们推测射频消融术与索拉非尼的应用相结合可以提高射频消融的疗效。2．研究目的：2．1研究证实索拉菲尼是否能延长肝癌患者的平均生存时间。对于接受射频消融的进展期肝癌患者，索拉菲尼是否能延长射频消融的间隔；2．2体外试验验证索拉菲尼对人脐静脉血管内皮细胞(HIⅣEC)及肝癌细胞系(H印G2)的影响；2．3通过体内试验验证通过口饲索拉菲尼拮抗肿瘤血

5、管生成，能否扩大射频消融引起的肝癌动物模型肿瘤毁损面积。3．实验方法：3．1、病历资料：收集2008年8月至2011年12月之间收治于浙江大学医学院附属第二医院肝胆外科的23例不能手术切除的给予索拉非尼治疗的肝癌患者病历资料，所有患者均规范服用索拉菲尼，其中8人同时联合射频消融治疗。所有参与本实验研究患者均签署知情同意书；本项研究获得本院伦理审查委员会批准。所有患者按照欧洲肝病协会制定的肝癌诊断标准，如不符合则通过肝穿活检证实为肝癌。所有患者接受索拉非尼初始剂量均为400毫克，每日两次，用药时间大于等于12周。相关数据取自患者的临床记录，

6、包括病史、生化检查结果、影像学检查结果，以及其他后续相关信息记录。中位随访时间19．2个月。随访终点为患者死亡，第二终点为连续2次实体瘤疗效评价标准(resist标准)评价为进展。3．2、体外实验：肝癌H印G．2和HuVEc细胞单层培养于lO％胎牛血清的l冲MI1640Ⅳ浙江大学博士学位论文中文摘要培养基。细胞孵箱条件为370C，含有5％c02。将不同索拉菲尼处理HUvEC及H印G2后，使用3·(4，5-dime廿1ylthiazol-2一y1)-2，5一diphellyte缸讹oli啪bromide法(MTT)、流式细胞仪和蛋白免疫印迹

7、方法检测细胞功能变化。3．3体内实验：雄性无胸腺裸鼠饲养于浙江中医药大学实验动物中心sPF级层流柜中，自由获得水和食物。人肝癌细胞皮下植入裸鼠腋下3周后，随机分配对照组或治疗组。每个治疗组每日分别经口灌注40和80毫克每公斤体重的索拉非尼；对照组只给予同等量溶剂。索拉非尼称重后储存于避光干燥的地方，给药前将其加热到60度1分钟，超声20．30分钟以液态形式溶解，给药10天后终止。每日检查小鼠，每周两次测量肿瘤大小。应用200w内部冷却射频消融系统(09036115，伯灵顿，马萨诸塞州)行RFA。小鼠取仰卧位，充分麻醉后直视下，将针尖作用端

8、为1厘米的冷循环射频消融电极插入肿瘤，保持温度70士50C，持续消融5分钟。砒後后处死小鼠，取出肿瘤，以2．3毫米厚度垂直于射频针轴面切片，挑出最大直径的切片。消融大小经线粒体活性的2％氯化三