盐酸小檗碱干预tnbs诱导小鼠结肠炎的作用机制初探

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1、上海交通大学医学院2010级硕士学位毕业论文上海交通大学医学院硕士学位论文盐酸小檗碱干预TNBS诱导小鼠结肠炎的作用机制初探作者姓名：李呈贞学号：1107109025指导教师：陈广洁研究员专业：免疫学申请学位：硕士培养单位：基础医学院研究方向：自身免疫病与免疫调节答辩日期：2013年4月资助基金项目：“985”工程三期项目基础临床交叉团队项目，上海市卫生局科教发展基金（2011177）。万方数据上海交通大学医学院2010级硕士学位毕业论文Preliminarystudyontheroleofberberinehy

2、drochlorideinthetreatmentofTNBSinducedmicecolitisAuthorname:ChengzhenLiStudentID:1107109025Directedby:GuangjieChen,ProfessorMajor:ImmunologyDegree:MasterInstitute:SchoolofBasicMedicalScienceResearchfield:AutoimmuneDiseaseandImmuneRegulationDateoforaldefense:2

3、013.04Thisprojectwassupportedbygrantsfrom"985"project（thethirdperiod）basisforclinicalcross-teamprojectsandScience&EducationDevelopmentFundofShanghaiMunicipalHealthBureau(2011177).万方数据万方数据~¥if~iir:r~§f{4~!~}rl~gi~1fidt::I8°or:!万方数据~¥if~!j~:r~r~N#~~1at~~[ifat~~

4、5t~~~~m~M~~~~¥&Y~&~~~O~~~~*~~~#~~4~~~m°D*~~f¥lIef"tC.BLl.!dry(上海交通大学医学院2010级硕士学位毕业论文摘要炎症性肠病(inflammatoryboweldisease,IBD)包括克罗恩病(Crohn'sdisease,CD)和溃疡性结肠炎(ulcerativecolitis,UC)，是一种胃肠道慢性非特异性炎症性疾病。其病因未明，属于自身免疫性疾病的一种，免疫调节紊乱是其发病的关键因素。三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的小鼠实验性结肠炎模型因发病机制

5、和病理表现与人类CD相似，故常被用于IBD治疗药物的筛选与评价。盐酸小檗碱(berberinehydrochloride，BBR)又称黄连素，其化学结构明确、药理作用广泛，能够治疗多种疾病，如高脂血症、糖尿病、多囊卵巢综合症、肥胖、脂肪肝和冠心病等。另有许多研究表明BBR还具有抗菌和诱导抗炎性应答的作用，因此临床上主要用于治疗胃肠炎、细菌性痢疾等肠道感染性疾病。目前，已有一些研究发现BBR在TNBS诱导的鼠CD模型中也具有治疗作用，BBR能通过抑制脂质过氧化反应、肠道菌丛生长及NF-κB的激活来缓解TNBS小鼠结

6、肠炎，但是BBR在IBD中对固有免疫应答细胞和适应性免疫应答细胞的调节作用还没有系统的研究。因此，我们以TNBS诱导的小鼠CD肠炎模型为基础，进一步探讨其在IBD治疗中的免疫调节机制，为临床治疗IBD提供理论依据。我们首先建立TNBS诱导的小鼠CD模型，观察BBR治疗对CD小鼠体重变化、局部结肠宏观变化和病理变化的治疗效果，并进一步通过ELISA、FACS和Real-timePCR方法检测了体内给予BBR治疗5天后，小鼠局部和外周T细胞亚群及巨噬细胞(macrophage，Mφ)亚群数量变化和相关的细胞因子和转录

7、因子的表达变化。另外，在体外诱导分化条件下，我们检测了BBR对Th1、Th17和Treg细胞亚群分化比例的影响。实验结果如下：1.与TNBS组相比，体内给予BBR能缓解小鼠发病的临床症状，体重恢复时间提前、速度加快，结肠大体损伤及病理评分下降。2.BBR治疗后，结肠匀浆上清炎症因子IFN-γ、IL-17、IL-6、IL-1β和TNF-α的水平显著下降，抗炎性因子IL-10则升高，免疫组化、流式和PCR结果证明结肠局部炎症细万方数据上海交通大学医学院2010级硕士学位毕业论文胞Th1、Th17、Mφ浸润减少，负调性

8、Treg细胞比例同样降低。3.BBR治疗后，外周脾脏中Th1、Th17和Treg亚群的比例及相关的细胞因子水平均有下降，相应的转录因子T-bet、RORγt、Foxp3也有不同水平的降低；BBR治疗可通过上调M2/M1的比例而发挥抗炎作用。4.同时我们在体外实验中发现BBR能抑制T细胞亚群Th1和Th17的分化，但对Treg细胞的分化未发现明显影响。综上所述，我们通过体内