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《棉铃虫hahr3基因的克隆及其植物rna干扰载体的构建new》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、棉花学报CottonScience2010，22（2）：157~162棉铃虫HaHR3基因的克隆及其植物RNA干扰载体的构建*尹富仕，曾洪梅，张雨良，邱德文，杨秀芬，王立梅（中国农业科学院植物保护研究所/农业部生物防治重点开放实验室,北京100081）摘要：采用RT-PCR方法克隆了棉铃虫蜕皮调节转录因子HaHR3基因，该基因含有1671bp的完整开放阅读框。序列分析表明，HaHR3与多种昆虫蜕皮调节转录因子高度同源。利用生物信息学方法对HaHR3的结构特征进行分析发现，HaHR3具有蜕皮调节转录因子超家族的典型特征，包括两个锌指结构和一个DN
2、A结合结构域，不存在信号肽序列和N糖基化位点。选择HaHR3基因的部分片段构建了RNAi中间载体pRNAi1017-HaHR3sa，再将HaHR3正反向序列亚克隆至植物表达载体pCAMBIA2300-35S-OCS，成功构建了由35s启动子调控的HaHR3基因的正反向RNA干扰载体pCAM-RNAi-HaHR3。这一载体的成功构建为下一步通过植物介导的RNA干扰技术防治棉铃虫打下了坚实的基础。关键词：棉铃虫；蜕皮调节转录因子；结构分析；RNA干扰中图分类号：S562.035.3文献标识码：A文章编号：1002-7807(2010)02-0157
3、-06CloningofHelicoverpaarmigeraGeneHaHR3andConstructionofItsRNAInterfer-enceVector*YINFu-shi,ZENGHong-mei,ZHANGYu-liang,QIUDe-wen,YANGXiu-fen,WANGLi-mei(KeyLaboratoryforBiologicalControlofMinistryofAgriculture,InstituteofPlantProtection,ChineseAcademyofAgricultur-alSciences,
4、Beijing100081,China)Abstract:Themolt-regulatingtranscriptionfactor(hormonereceptor3,HR3)controlstheexpressionofrelatedgeneclustersintheprocessofmoltingandplaysakeyroleintheregulationofmoltcascadereactions.ThecDNAsegmentsofHaHR3,HR3fromHelicoverpaarmigera,wereclonedusingRT-PC
5、R.Withanopenreadingframeof1671bp,HaHR3showed98%identitywithHHR3(AF337637)inhomologycomparison.ThestructureanalysisindicatedthatHaHR3hasthetypicalcharactersofthesuperfamilyofmolt-regulatingtranscriptionfactors,includingtwozincfingermotifsandaDNAbandingdomain.Neithersignalpept
6、idesequencenorN-glycosylatedsitewasfoundintheHaHR3.BasedonthesequenceofHaHR3,theRNAivectorpRNAi1017-HaHR3sawasconstructed.Bysubcloningthesense-antisensesequenceofHaHR3intotheplantexpressionvectorpCAMBIA2300-35S-OCS,pCAM-RNAi-HaHR3,theRNAivectoroftheHaHR3genewhichisdrivenbyth
7、e35Spromoter,wasconstructed.Thisprovidesasolidfoundationfortheapplicationoftheplant-mediatedRNAitechniqueinthebiologicalcontrolofHelicoverpaarmigera.Keywords:Helicoverpaarmigera;HaHR3gene;structureanalysis;RNAinterference蜕皮调节转录因子是广泛存在于多种昆虫的CfHR3等。果蝇蜕皮调节转录因子蛋白中、调控幼虫蜕皮过程中相关基因表
8、达的重要功DmHR3目前研究得较为透彻，已经证明在果蝇能蛋白，在昆虫蜕皮调控中起着十分重要的作的蜕皮级联反应和变态发育过程中起着十分重[1-2][3-
