黄花苜蓿mfnhx基因和mfp5cs基因的克隆和序列分析

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1、新疆农业科学2010，47(6)：1231—1235XinjiangAgriculturalSciences和Mfe5CS基因的克隆和序列分析曾光，石庆华，张博2，许磊，陈全家，张桦(1．新疆农业大学农学院／农业生物技术重点实验室，鸟鲁木齐830052；2．新疆农业大学草业工程与环境科学学N：／新疆草地资源与生态重点实验室，鸟鲁木齐830052)摘要：【目的】获得黄花苜蓿(MedwagofalcataL．)的MfNHX基因和MfP5CS基因，并对这两个基因进行序列分析。【方法】利用Trizol总RNA提取试剂盒提取了新疆野生黄花苜蓿的总RNA，并用特异引物对其进行RT—PC

2、R扩增，将得到的eDNA片段连接到pMD19一T载体上，最后将该载体转化大肠杆菌Dtt5a，并对阳性克隆进行了序列分析。【结果】MfNHX基因全长1626bp，Genbank登录号为GU265772；MfP5CS基因全长2148bp，Genbank登录号为GU180149。它们与紫花苜蓿核苷酸序列的同源性分别为99．63％和97．63％，与新牧1号杂花苜蓿核苷酸序列的同源性分别为99．45％和98．84％。【结论】研究已经获得MfNHX基因和^5cS基因，为进一步进行苜蓿抗逆境胁迫的研究奠定了基础。关键词：黄花苜蓿；MfNHX；MfP5CS；克隆；序列分析中图分类号：$55

3、1．7；S188文献标识码：A文章编号：1001—4330(2010)06—1231—05CloningandSequenceAnalysisofMfNHXandMfe5CSGenesinMedicagofalcataL．ZENGGuang，SHIQing—hua，ZHANGBo-XULei，ChenQuan—jia，ZHANGHua(1．KeyLaboratoryofAgriculturalBiotechnology，CollegeofAgronomy，XinjiangAgriculturalUniversity。Urumqi830052，China；2．KeyLabor

4、atoryofGrasslandResourcesandEcologyofXinjiang，CollegeofPratacuhuralandEnvironmentalScienceIXinfiangAgriculturalUniversity，Urumqi830052-China)Abstract：【Objective】ToobtainMfNHXand，5CSgenesinMedicagofalcataL．andanalyzetheirsequences．【Method】ThetotalRNAofwildMedicagofalcataL．inXinjiangwasextra

5、ctedwithTfizolTotalRNAExtractingReagentKitandamplifiedtocDNAbyRT—PCRusingspecialprimer．ThepMD19一TvectorlinkedwiththecDNAfragmentwastransformedintoEscherichiacoliDH5a，andthepositiveclonewassequenced．【Result】TheMfNHX(GenBankaccessionnumber：GU265772)is1626bp，theJ)l5cS(GenBankaccessionnumber：G

6、U180149)is2148bp．ComparedwithMedicago．sativaonNCBI，theMfNHXhomologyofnucleotidesequenceis99．63％，andtheMfP5CSis97．63％．ComparedwithMedicago．varia．XinmuNo．1onNCBI，theMfNHXhomologyofnucleotidesequenceis99．45％，andthe蟛P5CSis98．84％．【Conclusion】TheMfNHXand5CSgeneshavebeenobtained，whichlaysthefound

7、ationforfurtherresearchonstresstoleranceinalfalfa．Keywords：MedicagofalcataL．；MfNHX；MfP5CS；clone；sequenceanalysis0引言【研究意义】苜蓿是世界上最重要的豆科牧草，有“牧草之王”的美称，其种植面积约为3500×104hm。新疆野生黄花苜蓿的适应能力强，具有较强的抗寒、抗旱、耐盐碱的特点，从中开展基因克隆，对其抗逆境胁迫研究具有重要意义。【前人研究进展】盐胁迫主要有渗透胁迫和离子胁迫两种，它们共同影响植物的各种