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1、中国农学通报第23卷第11期2007年11月http://www.casb.org.cn畜牧兽医科学·33·TaqMan探针实时荧光定量PCR诊断犬瘟热病毒方法的建立1,2,31142苏建青,郑学星,候小强,岳妙姝,夏咸柱（1吉林大学畜牧兽医学院,长春130062；2解放军军事医学科学院军事兽医研究所,长春130062;3河北北方学院动医系，张家口075131；4长春理工大学生命科学技术学院，长春，130062）摘要:根据犬瘟热病毒核蛋白基因的保守序列分别设计一对引物及其相应的Taqman探针建立荧光定量PCR。构建FQ-PCR绝对定量的标准品,并对反应体系
2、进行优化,建立绝对定量的标准曲线。利用十倍稀释法检验方法的灵敏度并与普通RT-PCR法进行比较;特异性检验后进行临床标本的检验。结果显示:实验成功构建了绝对定量的参照质粒,标准曲线相关系数为0.994。犬瘟热病毒FQ-PCR检测反应的灵敏度为10TCID50;5种非犬瘟热病毒病原体检测均为阴性;说明实验建立的FQ-PCR具有快速、灵敏和稳定的特点,适用于临床样品的检验。关键词:TaqMan探针;荧光定量;犬瘟热病毒中图分类号:S858.292;5858.92文献标识码:BEstablishmentofaTaqMan-basedReal-TimeFQ-PCRA
3、ssayforDetectionofCanineDistemperVirus1,2,31142SuJianqing,ZhengXuexing,HouXiaoqiang,YueMiaoshu,XiaXianzhu(1CollegeofAnimalScienceandVeterinaryMedicine,JilinUniversity,ChangChun130062,2InstituteofMilitaryVeterinary,AcademyofMilitaryMedicalSciencesofPLA,Changchun130062,3DepartmentofA
4、nimalMedicine，HebeiNorthernCollege,Zhangjiakou075131,4ChangchunUniversityofScienceandTechnology,Changchun130062,)Abstract:Accordingtoconservativesequenceofcaninedistempervirusnuclearproteinsgene,apairprimersandTaqManprobeweredesigned,respectively.ThestandardrecombinantplasmidsforNg
5、enewereconstructedasreferencestandardusedinabsolutequantificationassay.ThereactionconditionsofFQ-PCRwereoptimized.ThesensitivityofassaywastestedwithtenfoldserialdilutionofCDVandcom-paredwithordinaryRT-PCR.Thequantitativecurvewasestablishedusingreferencestandardplasmids.Theclinicsam
6、plesweredetectedafterspecificityassay.TheresultsdemonstratedthattheplasmidforFQ-PCRwasfavorable.Theregressioncoefficientofthequantitativecurvewas0.994.ThedetectionsensitivityofFQ-PCRwas10TCID50andthespecificitywasdeterminedbytestingfiveotherspecimens,allofwhichyieldednegativeresult
7、s.Thedetectionsystembasedonreal-timeRT-PCRwasrapid,sensitiveandsteady,whichcouldbeusedtodetecttheclinicsamples.Keywords:TaqManprobe,flurogenicquantitative,CanineDistemperVirus0引言（CanineDistemperVirus，CDV）感染引起的是一种急犬瘟热（CanineDistemper,CD）是由犬瘟热病毒性、高度接触性传染病，是对养犬业、毛皮动物养殖业基金项目：中国人民解放军总后勤
8、部科技攻关项目（06G138）资助。第一作者简介：苏
