抗ena六项抗体诊断试剂盒（酶免斑点法）说明书

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1、北京和杰创新生物医学科技有限公司抗核周因子（APF）检测试剂盒（间接免疫荧光法）说明书【产品名称】中文名称：抗核周因子（APF）检测试剂盒（间接免疫荧光法）英文名称：DetectionKitforAnti-perinuclearFactor（IndirectImmunofluorescence）【包装规格】100人份/盒【预期用途】北京和杰创新生物医学科技有限公司生产的抗核周因子（APF）检测试剂盒（间接免疫荧光法），用于定性检测人血清或血浆中的APF抗体。【检测原理】APF的检测采用间接免疫荧光法（IndirectImmunofluor

2、escence，IIF），抗原来自正常人脱落的颊粘膜上皮细胞，在与病人待检血清反应后，加入荧光素（FITC）标记的兔抗人IgG抗体，最终于显微镜下作形态学的定性判断。【主要组成成分】序号组成剂型规格数量1APF抗原片固体10人份/张10张2APF荧光二抗液体3mL/支1支3APF阳性对照液体0.3mL/支1支4APF阴性对照液体0.3mL/支1支5APF封片剂液体4mL/支1支6盖玻片固体15片/盒1盒7PBS粉剂固体12.2克/袋2袋8吐温液体2mL/支2支9使用说明书固体1份1份其中APF抗原片主要组分为正常人脱落的颊粘膜上皮细胞；A

3、PF荧光二抗主要组分为FITC标记的兔抗人IgG。【储存条件及有效期】2-8℃避光保存（抗原片-20℃保存），有效期6个月。第4页共4页北京和杰创新生物医学科技有限公司【样本要求】1、人血清或血浆，要求清亮、无沉淀、无黄疸；2、样本1周以内检测可在4℃条件下贮存；3、样本1周以上检测需在-20℃条件下冻存，且避免反复冻融。【检验方法】1．准备：从冰箱中取出APF抗原片，待其恢复至室温后剪开包装。将洗涤用的PBS粉剂用蒸馏水溶解至1L，加入2mL吐温，混匀后作洗涤和标本稀释用。2．稀释：待测血清用洗涤液作1:20稀释。3．加样：在倒扣板的反

4、应孔内分别加入稀释好的血清和阴阳性对照，25μl/孔。注意：加样时避免产生气泡。4．孵育：将抗原片盖在倒扣板对应的凹槽里，室温孵育30min。注意：确保每个标本均能够与抗原基质相接触，而标本之间不相互接触。5．洗涤：取出抗原片，用洗涤液轻轻从一侧将反应液冲洗掉，浸泡至洗片缸内，静置5min后，再用蒸馏水冲洗1次。6．加样：在倒扣板的反应孔内加入APF荧光二抗，25μl/孔。注意：加样时避免产生气泡。7．孵育：用纸擦去抗原片周边和反面多余液体后，将抗原片盖在倒扣板对应的凹槽里，室温孵育30min。注意：确保每个标本均能够与抗原基质相接触，而

5、标本之间不相互接触。8．洗涤：重复步骤5。9．封片：在盖玻片上滴加封片剂。用纸擦干抗原片周边和反面多余液体后，将载片的抗原基质朝下置于准备好的盖玻片上，完成封片。10．结果观察：荧光显微镜下观察结果。【参考值（参考范围）】APF阳性细胞细胞核周围出现圆形、均质的特异性绿色荧光颗粒，阴性细胞细胞核周围无特异性荧光颗粒。【检验结果的解释】在荧光显微镜下观察，颊粘膜细胞细胞核呈现橘红色，APF阴性细胞胞浆均匀清亮无荧光颗粒；APF阳性细胞细胞核周围出现圆形、均质的绿色荧光颗粒，阳性细胞与颗粒的大小和多少无关。观察同一反应孔，大于5个APF阳性细

6、胞判为APF抗体阳性，5个以下为可疑，少于2个为阴性。【检验方法的局限性】该试剂盒只提供APF抗体的检测结果，具体病情及诊断应由临床医生结合临床表现和其他信息综合判断。第4页共4页北京和杰创新生物医学科技有限公司【产品性能指标】阳性符合率：从室内阳性质控品P1-P10（共计10份阳性血清标本）中随机抽取3支用试剂盒进行检测，其检测结果均为阳性。阴性符合率：从室内阴性质控品N1-N15（共计15份阴性血清标本）中随机抽取3支用试剂盒进行检测，其检测结果均为阴性。批内重复性：用试剂盒测定1份室内阳性质控品，重复检测5孔，其检测结果均为阳性。批

7、间重复性：用3个批号的试剂盒测定1份室内阳性质控品，每批重复检测5孔，其检测结果均为阳性。最低检出限：用企业内部检出限参考品对试剂盒进行检测，在APF参考品滴度为1：100时，结果应为阳性。【注意事项】1本试剂盒只做定性检测。2建议在200倍镜下观察结果，由上至下、由左至右观察整个反应孔。3注意区分细胞内形态不规则的非均质荧光颗粒。4冲洗抗原片时，动作要轻柔，防止抗原细胞脱落。5APF封片剂避免与皮肤发生接触。6对照血清经检测HBsAg、抗HCV抗体、抗HIV抗体均为阴性，但试剂盒的所有组分都应视作潜在传染源小心处理。【参考文献】1.Ni

8、enhuis,R.L.,Mandema,E.ANewSerumFactorinPatientswithRheumatoidArthritis;theAntiperinuclearFactor.