初级检验士考试(微生物学检验)讲义第十章细菌生物化学试验

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1、woed版-精品资料细菌的生物化学试验●考点　　碳水化合物的代谢试验　　蛋白质和氨基酸的代谢试验　　碳源和氮源利用试验　　各种酶类试验　　抑菌试验　　复合生化试验　　【内容讲解】　　不同细菌具有各自独特的酶系统，因而对底物的分解能力各异，其代谢的产物也不相同。这些代谢产物又各具有不同的生物化学特性，为此，可利用生物化学的方法测定这些代谢产物以鉴定细菌。　　一、碳水化合物的代谢试验　　原理：　　由于细菌各自具有不同的酶系统，对糖的分解能力不同，有的能分解某些糖产生酸和气体，有的虽能分解糖产生酸，但不产生气体，有的则不分解糖。据此

2、可对分解产物进行检测从而鉴别细菌。　　1.糖（醇、苷）类发酵试验　　原理：由于各种细菌含有发酵不同糖（醇、苷）类的酶，故分解糖　类的能力不同，分解糖类后的终末产物亦不一致，有的产酸、产气，有的仅产酸，故可利用此特点以鉴别细菌。　　培养基：在培养基中加入0.5%～1%的糖类（单糖、双糖或多糖）、醇类（甘露醇、肌醇等）、苷类（水杨苷等）。　　方法：接种，培养。　　结果：　　产酸：培养基中的指示剂呈酸性反应。　　产气：可使液体培养基中倒管内或半固体培养基内出现气泡，固体培养基内有裂隙等现象。　　不分解：培养基中除有细菌生长外，无任何

3、其他变化。　　应用：是鉴定细菌最主要和最基本的试验，特别对肠杆菌科细菌的鉴定尤为重要。　　2.氧化-发酵试验（0/F试验）　　原理：　　氧化型：仅在有氧环境中分解葡萄糖　　发酵型：在有氧或无氧环境中都能分解葡萄糖　　产碱型：在有氧或无氧环境中都不能分解葡萄糖　　培养基：HL（Hugh-Leifson）培养基　　方法：将待检菌同时穿刺接种两支HL培养基，其中一支培养基滴加无菌的液体石蜡（或其他矿物油），高度不少于1cm。将培养基于35℃培养48h或更长。　　结果：　开管封闭管产碱型--氧化型+-发酵型++精品资料分享woed版-

4、精品资料　　　　　　3.β-半乳糖苷酶试验（ONPG试验）　　原理：　　　　邻-硝基酚-β-D-半乳糖苷（ONPG）β-半乳糖苷酶邻-硝基酚　　（黄色）　　试剂：0.75MONPG溶液　　方法：从克氏双糖铁培养基上取菌，于0.25ml无菌生理盐水中制成菌悬液，加入一滴甲苯并充分振摇，使酶释放。将试管置37℃水浴5min，加入0.25mlONPG试剂，水浴20min～3h观察结果。　　结果：菌悬液呈现黄色为阳性反应，一般在20～30min内显色。　　应用：　　迅速及迟缓分解乳糖的细菌ONPG试验为阳性，而不发酵乳糖的细菌为阴性。

5、　　本实验主要用于迟缓发酵乳糖菌株的快速鉴定。　　4.七叶苷水解试验　　原理：　　　　培养基：七叶苷培养基、胆汁七叶苷培养基。　　方法：将待检菌接种于七叶苷培养基中，培养后观察结果。　　结果：培养基变为黑色为阳性，不变色者为阴性。　　应用：主要用于D群链球菌与其他链球菌的鉴别。　　精品资料分享woed版-精品资料　　5.甲基红试验　　原理：　　　　培养基：葡萄糖蛋白胨水培养基　　方法：将待检菌接种于上述培养基中，培养2～4d，于培养基内加入甲基红试剂，立即观察结果。　　结果：呈现红色为阳性；橘红色为弱阳性；黄色为阴性。　　应用

6、：　　　　肠杆菌科：沙门菌属、志贺菌属、枸橼酸杆菌属、变形杆菌属（+）　　肠杆菌属、哈夫尼亚菌属（-）。　　6.V-P试验　　原理：　　　　培养基：葡萄糖蛋白胨水培养基　　方法：将待检菌接种于上述培养基中，于35℃培养48h后加入甲液（6%α-萘酚酒精溶液）和乙液（40%KOH溶液），振摇。　　结果：在数分钟内出现红色为阳性；如无红色出现且于35℃4h后仍如故者即为阴性。　　应用：本试验常与甲基红试验一起使用，因为前者阳性的细菌，后者通常为阴性。　　二、蛋白质和氨基酸的代谢试验　　原理：不同种类的细菌分解蛋白质的能力不同。细菌

7、对蛋白质的分解，一般先由胞外酶将复杂的蛋白质分解为短肽（或氨基酸），渗入菌体内，然后再由胞内酶将肽类分解为氨基酸。　　1.明胶液化试验　　原理：　　方法：将被检菌穿刺接种于明胶培养基，于22℃培养7d，逐日观察结果。若用35℃孵育，因明胶在此温度下自行液化，故在观察结果前，先置4℃精品资料分享woed版-精品资料冰箱内30min，再看结果。　　　　结果：培养基呈液化状态为阳性　　应用：　　肠杆菌科细菌的鉴别：沙雷菌、普通变形杆菌、奇异变形杆菌、阴沟杆菌等可液化明胶，而其他细菌很少液化明胶。　　厌氧菌如产气荚膜梭菌、脆弱类杆菌等

8、也能液化明胶。　　多数假单胞菌也能液化明胶。　　2.吲哚（靛基质）试验　　原理：　　　　培养基：蛋白胨水培养基　　方法：将待检菌接种于上述培养基中，于35℃培养24～48h，沿试管壁慢慢加入吲哚试剂。　　结果：于两者液面接触处出现红色为阳性，无色为阴性。　　应用：主要用于肠杆