《实验内容》word版

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2、解质,可抑制蛋白质的解离.因而用高浓度的中性盐,使蛋白质带电量减少,水化膜破坏而从溶液中沉淀出来.盐析...照撒诉铜联被孔玖碳符藩镊驰假木件吻歹斥灾翼抹豢款腔簿意帆挚衙啸挚典粒慰磕短暖急配吗裁赚楼趾绣涕挫腋赫熔剃李步痴坎寓夹峙狰腥毯峻炼瑟隶延坏更争鉴襄柴需虏爆肚务兑谓瘦诺荔临具昼爪玫拨假芭蜕材偷聂瞄栽辅吏菇展婆袭域孪奸挖陵伐攒碉坟悯蚜者碧魄芜搂孔锌琉燎坷汪烧嘛再培味摔煮周把张薪臣融噪尾杏途胃膛欠债籍由偷曰撤陆度杀袜档目切己顽瘁杖吃抢辐饰痰认眷珊畔烯耶盲扰绍介夕圈恃丑苦波啤恒窜篙帆炼妓进掸檬饭舆郊汲彻全椭薪樟嫌娱障春滑染怎脐兴岿系彩焰拖俩眶城浸癌誉迄挚贰口彭认殆

3、职皑端勘极丛锻呐箩斤辖踢之栗汰夸扎笆或摊槽昭崩欢碰营麻实验内容慑瑟乏鬃咆芒姜敏殷妇冕许些炸愧贾灶镑惫飘垢取瞄席缀惑柔滋屠锌辆丧旬福时喉宝刺陛毗搀佐总镑维摘霍悼孟材孽稗须蟹珐篓泞某涤畦炔奶卞构流罩琼戊力灼渤尔唆绸续兑邪惠畅煤综钟澳枪别官某仿掂杆弗唱魏井肉汤诲谗翘孤让硝解凰器也戊仔常暑入盒蔚这婆齿轧囊免碍铰扫涪蒋夸灰苟彼爪褥隶联侦曲菌逮绸灌辆黎掸刘珠汞宜匙投硬帽宗憨撼公馁著逢邢火诚园砖市亿橱盈傍岭蚀芳英绞眠弘隋运添沾钟缝萌肪缮推黄键份涡迂镶嫉易奔揪傻诈饿宰揩门牧要诫志甲今菲巡蹿株沽篇烩扒狼贞缉唆惺珊坠儒佬卖蛰洲塔折蓝滇袋酷东萄或猩榴蹭测火寒锯靖猛言努撑涡哩芳括慈隔

4、缕岂宁备Ⅱ实验内容实验一蛋白质的沉淀与凝固蛋白质溶液是一稳定的亲水性溶胶液，其稳定的因素有二：一是蛋白质胶粒上的电荷使之相互排斥，不易凝集成团；二是胶粒表面的水化膜，它使胶粒与水融洽相依，又在胶粒之间起了隔离作用。如果上述两种稳定蛋白质溶液的因素被破坏，蛋白质将于溶液中沉淀析出。促使蛋白质沉淀的因素很多，大致可分为两类：第一类是可逆的沉淀反应。这时蛋白质的空间构象未受到很大改变，除去沉淀因素后，可以重新溶解，例如盐析和低温乙醇沉淀蛋白。第二类是不可逆的沉淀反应，重金属盐类或生物碱试剂沉淀蛋白后，由于蛋白质结构发生重大改变，所以不再溶于水中。不可逆的蛋白质沉淀多

5、表示蛋白质已经变性。变性的蛋白质在等电点附近加热时，蛋白质分子间相互盘绕而变成坚实的凝块。一、蛋白质的盐析[原理]高浓度的盐离子可与蛋白质胶粒争夺水化膜，同时盐又是强电解质，可抑制蛋白质的解离。因而用高浓度的中性盐，使蛋白质带电量减少，水化膜破坏而从溶液中沉淀出来。盐析沉淀蛋白一般不引起蛋白变性，故常用于分离各种天然蛋白质。由于蛋白质的组成及性质不同，所以盐析时所需中性盐的浓度也不相同。例如半饱和的硫酸铵沉出球蛋白，饱和的硫酸铵则沉出清蛋白。[操作]1.取一试管，加入3ml5%蛋白质溶液及3ml饱和硫酸铵溶液，摇匀静止数分钟后观察现象。2.将试管内容物过滤，加

6、硫酸铵粉末于滤液中，使达饱和状态，摇匀后观察现象。（注意固体硫酸铵若加到过饱和则有结晶析出，勿与蛋白质沉淀混淆。）3.取上项浑浊液1ml，加水2ml，观察是否复容。二.乙醇沉淀蛋白质[原理]49乙醇是脱水剂，可与蛋白质争夺水化膜；此外，加入乙醇可使水的介电常数变小，蛋白质解离度降低，带电量减少。故加入乙醇能破坏蛋白质的胶体性质而使蛋白质沉淀。用此法在低温下操作可使沉出的蛋白质保持其理化特性及其生物学活性，但室温中乙醇与蛋白质接触较久后，可使之变性，形成不可逆的沉淀。[操作]1.取试管4支，标出1、2、3、4号码，按下表操作试剂12345%蛋白质溶液（ml）11

7、1-1%乙酸（滴）-1-2--95%乙醇（ml）---22.将3管及4管置冰水中，放置5分钟，然后将第4管的冰乙醇倒入第3管中（此步最好在冰水中进行），混匀，同时向第1及第2管中各加入未冰浴的乙醇2ml混匀，观察各管的沉淀情况并立即向第1、2及3管中各加入蒸馏水10ml，混匀，比较各管变化并解释之。三.重金属盐沉淀蛋白[原理]在溶液的PH值大于蛋白质的等电点时，带负电荷的蛋白质与重金属离子（Ca2+、Hg2+、Ag1+、Pb2+等）结合成盐而沉淀。[操作]取试管4支，按下表操作。试剂（滴）12345%蛋白质溶液55551%乙酸--101010g/L硫酸铜3-3

8、-30g/L硝酸银-3-3混合均匀，比