微环境中肿瘤相关成纤维细胞介导的清热化湿中药抗胰腺癌作用研究

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1、万方数据复旦大学博士研究生毕业论文微环境中肿瘤相关成纤维细胞介导的清热化湿中药抗胰腺癌作用研究复旦大学附属肿瘤医院中西医结合临床博士生陈联誉导师刘鲁明教授导师组成员陈震教授王鹏博士万方数据主要缩略词表一一一中文摘要英文摘要目录论文一一一前言⋯一一第一部分：背景12中药抑制胰腺癌移植瘤生长及转移实验研究材料与方法结果一⋯讨论结语一一一参考文献⋯⋯一9一一一一一13一一一一一16第二部分：中药直接／间接抑瘤作用初探背景一⋯⋯一一材料与方法一⋯结果一一一一一讨论一一⋯结语一一一一一一一一一一一一一一参考文献

2、一一一一一一一19————————————————————20————————————————————22一一一24⋯一一26第三部分：中药对肿瘤相关成纤维细胞增殖及其来源的CXCL家族趋化因子表达及分泌的影响研究背景材料与方法一一⋯一一结果一一⋯讨论结语参考文献-29-36-40—41-43第四部分：肿瘤相关成纤维细胞来源的CXCL家族趋化因子对胰腺癌细胞恶性表型的影响研究背景材料与方法一一一一一一一一⋯一一一结果讨论⋯454753万方数据结语一一一一⋯一一一一一一⋯～一参考文献一第五部分：背景肿瘤

3、相关成纤维细胞介导的中药对胰腺癌转移侵袭的影响研究材料与方法一一结果讨论结语一一一一参考文献附录：综述1一一一综述2一一⋯一在读期间发表论文一一一学术会议交流一一⋯一一致谢一论文独创性声明一一55————————————57一一一59——————————————60——--75--76论文使用授权声明～一一一777879万方数据微环境中肿瘤相关成纤维细胞介导的清热化湿中药抗胰腺癌作用研究复旦大学博士学位论文主要缩略词表QYHJQingyihuajiformula清胰化积方CAFSCancerassoc

4、iatedfibroblasts肿瘤相关成纤维细胞NFsNormalfibroblasts正常成纤维细胞ATCCAmericantypeculturecollection美国模式培养物集存库GAPDHGlyceraldehydephosphatedehydrogenas磷酸甘油醛脱氢酶IU’_PCRReversetranscription—polymerasechainreaction逆转录聚合酶链反应SDStandarddeviation标准差SPSSStatisticalpackageforthe

5、socialsciences社会科学统计套装软件EGFEndothelialgrowthfactor内皮生长因子bFGFBasicfibroblastgrowthfactor成纤维细胞生长因子HEHematoxylinandeosin苏木精伊红FCMFlowcytometry流式细胞计数CCl(．8Cellcountingkit-8细胞计数试剂盒．8ICCImmunofluorescence免疫荧光ElisaEnzyme-linkedimmunosorbentassay酶联免疫吸附试验法CXCLC-X

6、-CligandCXC趋化因子配体CXCRC-X-CreceptorCXC趋化因子受体CKPancytokeration人广谱细胞角蛋白cc．SMAAlpha-soothmuscleactin肌动蛋白c【万方数据微环境中肿瘤相关成纤维细胞介导的清热化湿中药抗胰腺癌作用研究复旦大学博士学位论文微环境中肿瘤相关成纤维细胞介导的清热化湿中药抗胰腺癌作用研究中文摘要目的探讨清热化湿中药(清胰化积方，QYHJ)抗胰腺癌过程中肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)的作用。方法1．建立胰腺癌皮下移植瘤模型，腺癌生长的影响。

7、2．建立胰腺癌原位移植瘤模型，腺癌肝转移的影响。第一部分分成QYHJ组和生理盐水对照组，评价QYHJ对胰第二部分1．家兔胃饲QYHJ获取含中药血清，并取正常家兔血清为对照组。56℃水浴锅，30分钟，制备灭活的中药血清及正常血清。2．CCK-8法测定正常血清、正常灭活血清、中药血清、中药灭活血清对人胰腺癌细胞体外增殖的影响，并绘制细胞增殖曲线。3．体外迁移及侵袭实验(Transwell)检测正常血清、正常灭活血清、中药血清、中药灭活血清对人胰腺癌细胞体外迁移及侵袭能力的影响。第三部分采用原代培养的方法建

8、立两对人胰腺正常成纤维细胞(NFs)及对应的肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)。采用免疫荧光(ICC)及Western．blot对原代培养成的成纤维细胞进行鉴定。采用RT-PCR、Western．blot技术检测NFs、CAFs及经含药血清处理的CAFs之间CXCLl、2、8表达的差异。CCK-8法测定含中药血清对CAFs体外增殖的影响。采用免疫组化技术评价QYHJ干预后CAFs在小鼠移植瘤中增殖能力的变化。采用免疫组化及Elisa技术评价CAFs表达、分泌