康莱特联合吉非替尼对人肺腺癌a549细胞株fas、akt2蛋白及mrna表达的影响

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1、目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5研究论文康莱特联合吉非替尼对人肺腺癌A549细胞株FAS、AKT2蛋白及mRNA表达的影响前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯9一日U菁⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．11结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．19附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

2、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．22附表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．29讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．35结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．41参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．41综述FAS蛋白与非小细胞肺癌关系研究进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯48致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．57个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．58中文摘要康

3、莱特联合吉非替尼对人肺腺癌A549细胞株FAS、AKT2蛋白及mRNA表达的影响摘要目的：肺癌是发生率和死亡率居于首位的恶性肿瘤，晚期非小细胞肺癌(NSCLC)的治疗效果更不理想。吉非替尼是一种表皮生长因子受体一酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKl)，它能有效抑制肿瘤细胞的生长、侵袭、转移并能抑制肿瘤新生血管的形成。随着近些年EGFR-TKII临床应用的深入，EGFR—TKI业已成为EGFR突变阳性的晚期非小细胞肺癌的一线首选治疗方法，但随之发现的耐药问题成为了限制EGFR-TKI疗效的一大难题，

4、因此，寻找能够增加EGFR—TKI疗效、甚至能解决其耐药的方法成为了目前研究的热点。康莱特注射液是传统的中药抗肿瘤制剂，一些研究发现，康莱特联合化疗能显著提高晚期非小细胞肺癌的治疗效果，有协同增效、增敏甚至逆转耐药的作用。大量临床研究发现，P13K／AKT通路被持续活化，抑制肿瘤细胞的凋亡是吉非替尼疗效受限的一个重要作用机制。本实验应用MTT方法、流式细胞学、免疫组织化学，逆转录聚合酶链式反应(RT—PCR)方法，检测吉非替尼、康莱特作用于人肺腺癌A549细胞株后对细胞增殖抑制、凋亡率、FAS、

5、AKT2mRNA及蛋白等的表达来探索吉非替尼联合康莱特对A549细胞株的作用及其机制。方法：1体外培养人肺腺癌A549细胞，选取对数生长期细胞进行实验。实验分为空白对照组，吉非替尼组，康莱特组，吉非替尼联合康莱特组；吉非替尼组设置浓度梯度为：O．1、0．5、l、5、10、20、40umol／L，作用时间分别为24h、48h、72h：康莱特设置浓度梯度为：5、10、20、40、80、100、160ul／ml，作用时间：24h、48h、72h；联合组：根据康莱特48h抑制率求IC。。，分别与各浓度吉

6、非替尼联合作用24h、48h、72h；应用四甲基偶氮唑蓝(tetrzolium-basedcolorimetricassayMTT)法分别测定各药物不同浓度，不同作用时间的抑制率。2根据康莱特48h抑制率，得IC。。=80ul／ml，故联合用药组康莱特中文摘要取80ul／ml，吉非替尼选择本实验中最高作用浓度40umol／L，共同处理48h后，应用流式细胞学检测各处理组中细胞凋亡率情况。3选取对数生长期细胞置入六孔板培养，分别加入吉非替40umol／L培养48h，康莱特80ul／ml培养48h，

7、两药联合培养48h，培养后细胞爬片，应用S-P免疫组织化学方法检测FAS、AKT2蛋白的表达。4取对数生长期细胞，调整细胞浓度为5×i04／ml接种于培养瓶中，根据对照组与实验组分别加入药物作用48h后提取RNA，检测总RNA的量、纯度及完整性，反转录合成cDNA，设计引物，通过聚合酶链反应将cDNA扩增，扩增产物经过电泳，应用凝胶成像系统及分析软件对FAS．mRNA、AKT2-mRNA进行分析。结果：lMTT结果显示：1．1用MTT法测康莱特单药作用于人肺腺癌A549细胞株时的细胞抑制率与对照

8、组比，随着康莱特浓度(5、10、20、40、80、i00、160ul／m1)，细胞抑制率明显增加，P