stat3在非小细胞肺癌中表达及作用的研究

《stat3在非小细胞肺癌中表达及作用的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、天津医科大学硕士学位论文中文摘要目的：信号转导转录激活因子3(Signaltransducerandactivatoroftranscription3，STAT3)是信号转导与转录激活因子家族(Signaltransducorandactivatoroftranscription，S吖瓜)的重要成员。其被生长因子与细胞因子等细胞外信号物质激活，可调节细胞转化、抑制细胞凋亡，并与其增生与分化及肿瘤的发生发展有关。最近的研究结果表明：STAT3蛋白的异常活化与头颈部鳞状细胞癌、乳腺癌、前列腺癌、恶性淋巴瘤、结直肠癌等

2、多种恶性肿瘤的发生、发展及预后密切相关。本研究旨在观察信号转导转录激活因子3(STAT3)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达和活化，探讨其表达水平及磷酸化状态与性别、年龄、肿瘤大小等临床病理特征的关系及对预后的影响。通过体外干扰实验，探讨STAT3在肺癌细胞生长、增殖上的作用，进一步阐明STAT3在肺癌发生发展中的作用。方法：1．收集病例资料完整的非小细胞肺癌标本127例，其中腺癌lOOff0，鳞癌27例。同时收集癌旁组织标本5660。应用免疫组织化学法检测p-STAT3在肿瘤组织及癌旁组织中的表达情况。结合临

3、床资料进行对比分析，研究P．STAT3的表达与患者年龄、性别、临床分期、EGFR突变状态等临床病理特征的关系，进一步进行生存分析，观察表达情况与预后的关系。2．构建靶向沉默STAT3基因的shRNA载体，Fugene6转染293T细胞制备病毒，感染人肺癌A549细胞，通过嘌呤霉素(puromycin)筛选阳性表达克隆，WesternBlot对基因干扰效果进行鉴定、分析，进而筛选出稳定干扰细胞系。采用MTT法、平板克隆形成实验观察STAT3干扰后肺癌A549细胞增殖状态改变。结果：1、P．STAT3的表达主要定位于

4、肿瘤细胞的胞核中、在肺癌组织中高表达，其阳性率为64．6％(82／127)、癌旁组织中为37．5％(21／56)，差异有统计学意义(P=O．001)。表达水平与EGFR突变状态、性别、吸烟史、临床分期和淋巴结转移有关(P0．05)。生存分析发现，p．STAT3阳性表达组的总生存时间显著缩短(P=O．048)。2、酶切及测序结果表明构建的慢病毒载体pLKO-STAT3一shRNA2___插入序列正确。天津医科大学硕士学位论文3、Fugene6转染293T细胞，收集病

5、毒进行细胞感染与嘌呤霉素筛选。筛选结果显示空白对照组的细胞全部死亡，而pLKO．STAT3．shRNA病毒感染细胞出现明显而且数量较多的细胞克隆形成。4、Western．blot鉴定干扰效果以及STAT3表达水平改变的结果显示shRNA．STAT3感染组的STAT3的表达明显减少，而空白对照组细胞STAT3的表达未见改变。5、MTT检测细胞增殖状态的结果显示：pLKO—STAT3．shI埘A阳性A549细胞同空白对照组相比，表现出较明显的抑制效应(P<0．05)，且其抑制效应随时问延长愈明显，表现出一定的时间抑制

6、效应关系。6、平板克隆形成实验的结果显示：shRNA．STAT3感染组A549细胞克隆形成率f15。18士2．33)％nfJ显低于空白对照组(26．34+2．17)％(P<0．05)。结论：磷酸化信号转导转录激活因子3(p．STAT3)在非小细胞肺癌中高表达，与临床分期、淋巴结转移和预后有关，干扰STAT3表达影响细胞增殖。表达水平与EGFR突变状态有关，有可能作为评价EGFR．TKI药物疗效的指标之一，并可能为靶向治疗提供新的靶点。关键词：磷酸化信号转导转录激活因子3(p—STAT3)NSCLC天津医科大学硕士

7、学位论文AbstractObjectIyes：STAT3isanimportantmemberofsignaltransducorandactivatoroftranscriptionfactorfamily(SignaltransducorandactivatoroftranscriptionjSTATs)．Itisactivatedbygrowthfactorsandcytokinesandmayregulatecelltransformation，inhibitapoptosisandcellprolife

8、rationanddifferentiation，andrelatedwithtumordevelopment．RecentstudiesindicatethatabnormalactivationofSTAT3isrelatedwithavarietyofmalignanttunaors．suchasheadandnecksquamouscellcarcinoma，br