外阴白斑患者病变部位的免疫组化观察

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1、外阴白斑患者病变部位的免疫组化观察张睿刘志军柳曦光李琛曹晓辉(黑龙江省医院皮肤科150036)【摘要】目的观察外阴白色病变患者局部组织的血管情况，探讨外阴白色病变的发病机理。方法以25例外阴白色病变患者为观察组,20例其他外阴手术者的外阴皮肤为对照组，采用免疫组化SP法，观察CD34在外阴白斑病变皮肤中的表达及MVD值,并与对照组进行对照。结果CD34在三型外阴白色病变中均有表达,其阳性率与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.01),三型之间的阳性率比较差异亦有统计学意义(P<0.01)o外阴白

2、斑的MVD值与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.01),三型外阴白斑的MVD值比较差异亦有统计学意义(P<0.01)。结论外阴白斑存在血管的异常，血管的改变可能是造成营养不良的肓接原因。【关键词】外阴白斑免疫组化发病机理外阴白斑系指一组女阴皮肤、粘膜营养障碍而至的组织变性及色素改变的疾病。长期以来，将皮肤粘膜变白、变粗或萎缩的外阴病变统称为“外阴白斑(leukoplakia)"，也有将其中有非典型细胞增牛者诊断为“外阴白斑”，因而造成诊断标准的混乱。多年来，外阴白斑的概念(尤其所谓的癌前病变的

3、内涵)对国人影响至深，造成了很大的牛理■心理和社会影响。由此可知，木病的诊断显得尤为重要。其具体的具有特征性临床或病理改变成为早期诊断早期治疗的有力证据。木病的确切病因尚不清楚，除了全身性因素外，局部组织的营养不良可能是该病的病因之一。皮肤组织的营养往往与局部的血管密切相关。HE染色对血管壁无明显特异性，只能辨认少数血管oCD34为血管内皮细胞的特异性标记。我们应用免疫组织化学的方法观察了25例外阴白斑病变中CD34的表达，并与对照组做比较，现将结果报道如下。1资料和方法1.1临床资料25例观察组患者均为在我

4、院就诊的外阴白斑患者，均在外阴皮损处取组织活检。参照病理诊断标准⑴分为三型：其中增生型6例，硬化苔鲜型15例，混合型4例。对照组20例，为其他在我院行外阴手术的患者，在外阴正常组织部位取病理活检。其中观察组年龄19〜68岁，平均31岁；对照组年龄21・68岁，平均30.7岁，无显著性差异(P>0.05)o所有研究对象近两个月内无内、外用药史。1.2染色方法采用免疫组化的方法。所有标本均经10%福尔马林液固定，脫水，常规石蜡包埋,5μm厚连续切片。分别进行苏木精■伊红(HE)染色和免疫组织化学链霉素

5、抗生物素蛋白■过氧化物酶连接法(SP法)检测。以正常皮肤组织作对照。试剂：一抗：鼠抗人单克隆抗体CD34C工作浓度1：1000),二抗：抗鼠IgG；即用型链霉菌抗生物素蛋白■过氧化物酶(SP)试剂盒，液体3,3・二氨基苯联胺(DAB)酶底物显色试剂盒。1.3判定标准CD34阳性标准和MVD计数按参考文献［乙3］的方法并加以改进。先在低倍视野下选取微血管最丰富的区域，再在400倍视野范围计数被染成棕黄色的微血管数目，分辨不清或染色模糊的细胞不计入计数结果。由两名医生采用双盲法分别对同一切片计数，取两者的平均数作

6、为该切片的MVD值。1.4统计学方法采用t检验。2结果CD34在20例对照组中有16例可见阳性表达，在细胞膜和细胞浆表现为棕黄色至棕褐色。在三型外阴白斑病变中均有表达，其阳性率与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.01),三型之间的阳性率比较差异亦有统计学意义(P<0.01)o外阴白斑病变的MVD值与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.01),三型白色病变的MVD值比较差异亦有统计学意义(P<0.01)。见表lo表1两组CD34的阳性表达及MVD值3讨论外阴白斑是慢性外阴营养不良性

7、疾病，研究表明：其主要病理变化在真皮层，表皮的病变是继发的。硬化苔鲜型真皮浅层微小血管明显减少，使真皮微循环的血供减少，表皮失去营养支持而发生萎缩。增生型真皮乳头水肿及细胞变性,局部炎性细胞的刺激，使毛细血管痉挛、闭塞，导致局部的微循环障碍和胶原纤维生成障碍，从而引起表皮细胞发生不同程度的病变⑷。但迄今为止，引起上述病理变化的原因尚不清起。近年来国内外的研究认为其致病因素可能与自身免疫、遗传、HPV感染、代谢等多种因素有关⑸。人原始造血细胞抗原(CD34)表达于早期淋巴造血干细胞、祖细胞、血管内皮细胞、胚胎纤

8、维母细胞和某些神经组织的细胞，现多用于标记血管内皮细胞。文献报道显示,CD34显示血管内皮细胞吋特异性最高，优于内皮细胞的其他标记物⑹。CD34亦存在于皮肤组织及软组织中的树突状细胞⑺。本研究对照组皮肤CD34的阳性表达率高达80.0%,在外阴白斑三型患者皮肤组织中的阳性表达率降低，与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。对CD34阳性血管进行MVD计数结果外阴营养不良组的MVD值与对照