天葵提取物抗晶状体氧化损伤的作用及其机制研究

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1、贵阳医学院2013届硕士研究生论文《中国图书资料分类法》分类号：R965.1单位代码：10660学号：S100042贵阳医学院2013届硕士学位论文天葵提取物抗晶状体氧化损伤的作用及其机制研究研究生：张闽闽导师：宛蕾教授梁冰副教授年级：2010级专业：药理学2013年5月30日1贵阳医学院2013届硕士研究生论文目录摘要……………………………………………………………1前言……………………………………………………………4材料与方法…………………………………………………………4结果………………………………

2、……………………………15讨论……………………………………………………………36结论……………………………………………………………44参考文献……………………………………………………………45英文摘要……………………………………………………………49致谢……………………………………………………………53略缩词表…………………………………………………………54论文原创性声明……………………………………………………55附：综述……………………………………………………562贵阳医学院2013届硕士研究生论文

3、天葵提取物对过氧化氢诱导的人晶状体上皮细胞SRA01/04氧化损伤的保护作用及其机制研究专业名称：药理学研究生：张闽闽导师：宛蕾教授梁冰副教授中文摘要目的本研究采用过氧化氢（H2O2）诱导人晶状体上皮细胞（HumanLensepithelialcell,HLEC）SRA01/04系损伤，建立SRA01/04细胞氧化损伤模型，探讨天葵提取物对过氧化氢损伤的人晶状体上皮细胞SRA01/04系的保护作用，并探讨其机制。方法本研究采用过氧化氢（H2O2）与人晶状体上皮细胞（HumanLensepithelia

4、lcell,HLEC）SRA01/04系共同孵育以复制氧化损伤模型，再分别采用六种方法提取的天葵提取物对氧化损伤的人晶状体上皮细胞SRA01/04系进行干预，筛选出药物的最佳提取方法及有效浓度，从氧化损伤及细胞凋亡的角度进一步探讨中药天葵提取物治疗白内障的细胞及分子机制。(1)四甲基偶氮唑蓝法（methylthiazolyltetrazoliun,MTT）测定不同提取方法，不同浓度的天葵提取物对氧化损伤的人晶状体上皮细胞SRA01/04系增殖的抑制作用,筛选出药物的最佳提取方法及浓度；（2）倒置显微镜

5、下细胞形态学观察；(3)化学比色法检测天葵提取物对人晶状体上皮细胞SRA01/04系内总超氧化物歧化酶（T-SOD），谷胱甘肽过氧化物酶（glutathioneperoxidase,GSH-px）,过氧化氢酶（Catalase,CAT）的活性及总抗氧化能力（T-AOC），脂质过氧化物丙二醛（Malonaldehyde，MDA）含量的影响；(4)透射电子显微镜观察天葵提取物对人晶状体上皮细胞SRA01/04系细胞凋亡形态的影响；(5)流式细胞仪（flowcytometer,FCM）检测人晶状体上皮细胞S

6、RA01/04系内的线粒体跨膜电位（mitochondriamembranepotential,ΔΨm）的影响；(6)流式细胞仪（flowcytometer,FCM）AnnexinⅤ-FITC/PI双染法检测天葵提取物对SRA01/04凋亡率及细胞周期的影响；(7)WesternBlotting检测天葵提取物对SRA01/04内Bcl-2,Bax-2蛋白的表达的影响；(8)比色法检测天葵提取物对SRA01/04细胞中caspase-3、caspase-9活性的影响。3贵阳医学院2013届硕士研究生论文

7、结果：1.MTT结果显示模型组人晶状体上皮细胞SRA01/04系吸光度值比正常细胞对照组显著降低（P＜0.05）。六种方法提取的不同浓度的天葵干预的SRA01/04吸光度值均比模型组明显升高，细胞存活率分别为：TK甲醇(53.05±12.03)%，TK酒精(69.42±10.94)%,TK甲醇-乙酸乙酯(64.25±3.74)%,TK正丁醇(89.43±12.58)%，TK甲醇-正丁醇(71.23±6.02)%,TK水(78.45±3.80)%；其中TK正丁醇及TK水的保护效果较明显,与模型组比较有显

8、著性差异（P＜0.05)。2.倒置显微镜观察结果显示，SRA01/04在经过H2O2处理后，死亡率增加，生长受到抑制，而用天葵对细胞进行干预后，SRA01/04细胞形态接近正常细胞对照组组细胞的状态。3.化学比色法检测氧化指标结果显示，与正常细胞对照组相比，模型组T-SOD、GSH-px、CAT、T-AOC活性均显著降低，而TK组T-SOD、GSH-px、CAT、T-AOC活性与模型组相比均升高（P＜0.05）；模型组MDA含量比正常组显著升高，TK组M