实验三丹皮酚小肠吸收实验

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1、实验三丹皮酚小肠吸收实验【目的要求】1.掌握大鼠在体肠管回流的基本操作和方法。2.通过丹皮酚小肠吸收实验，测定丹皮酚在大鼠小肠的吸收速度常数（K），半衰期（t1/2）以及每小时吸收率。【实验材料】（一）仪器与材料1.超声清洗器；2.微量输液器（蠕动泵）；3.752型紫外可见分光光度计；4.恒温水浴锅；5.万分之一分析天平；6.其他：搪瓷盘；移液管（50mL，1mL各一个）；移液枪（1.0mL×2）；容量瓶（10mL×20）；烧杯（50mL×1）；离心管（2mL×12）；一次性注射器（50mL×1，2.5mL×1）；手术器械（大鼠

2、手术板，手术刀，手术刀片，手术剪，眼科剪，镊子）；棉线；纱布等。（二）试剂1.20%乌拉坦(200mg/mL)，腹腔注射麻醉剂量1g/kg(10mL/kg)；2.Krebs-Ringer磷酸缓冲液：每1000mL内含7.8g氯化钠，0.35g氯化钾，0.37g氯化钙，1.37g碳酸氢钠，0.22g磷酸二氢钠，0.22g氯化镁，1.4g葡萄糖;3.其他：酚红；生理盐水；蒸馏水。（三）药品及动物药品：丹皮酚原料药；丹皮酚微囊；动物：雄性大鼠200~250g，1只。【实验原理】根据质量作用定律，反应速度与反应浓度间的比例常数称为速率常

3、数。一级过程的速率常数单位以1/时间表示，而速度为单位时间内量的变化值，如，X表示体内药物量，以一段时间内△t药物变化量△X求得速度△X/△t５为平均速度，准确反映在某一段时间上的瞬时速度采用微积分表示即dX/dt。吸收过程属于一级吸收过程，与体内药物量一次方成正比，其中“－”表示体内药物量随时间增长而减少。Ka=－2.303×slopedX/dt为吸收速度；X为吸收部位药物量；X0为t=0时吸收部位药物量；t1/2为半衰期；Ka表观一级吸收速率常数。酚红的标准曲线绘制：精密称取酚红20mg，置100mL容量瓶中，加Krebs-

4、Ringer磷酸缓冲液溶解并稀释至刻度，制成200μg/mL储备液。吸取上述溶液0.5,1.0,1.5,2.0,2.5和3.0mL置于100mL的容量瓶中，用0.2mol/L的NaOH定容至100mL，即浓度分别为1.0,2.0,3.0,4.0,5.0和6.0mg/mL。以0.2mol/LNaOH溶液为空白，558nm测定吸收度，以吸收度A与酚红浓度C(μg/mL)进行线性回归。丹皮酚标准曲线的绘制：精密称取丹皮酚10mg置100mL容量瓶中，以K-R缓冲液定容至100mL，制成100μg/mL储备液。吸取0.2,0.4,0.6

5、,0.8和1.0mL的储备液于10mL容量瓶中加K-R缓冲液定至刻度，即浓度分别为2.0,4.0,6.0,8.0和10μg/mL；以K-R缓冲液为空白，274nm测定吸收度，以吸收度A与丹皮酚浓度C(μg/mL)进行线性回归。【实验方法】（一）酚红液配制（20mg/mL）称取酚红20mg后，加入少量蒸馏水混悬，加入少量碳酸氢钠并微热使溶解（必要时滴加数滴1NNaOH液），得甲液。另将Krebs-Ringer缓冲液的其它成分用蒸馏水溶解，得乙液。将甲液缓缓加入乙液中，添加适量蒸馏水至1000mL，即得。（二）供试液配制５称取丹皮酚

6、10mg，加入含酚红20μg/mL的酚红液50mL，37℃水浴并超声使溶解。称取丹皮酚制剂（含丹皮酚10mg）充分研磨，加入含酚红20μg/mL的酚红液50mL，37℃水浴并超声使溶解。（三）实验步骤1.大鼠麻醉：取禁食12h(自由饮水)200~250g的雄性大鼠，按1g/kg乌拉坦(20%)溶液作腹腔注射麻醉（翻正反射消失），并背位固定于手术台板上。2.小肠两端插管：沿腹部正中线（腹白线）切开腹部（约4cm），在距离胃幽门15cm和25cm处各插入细玻璃管并用线扎紧，缝合切口（不缝合，上覆以浸有生理盐水的纱布）。3.洗涤肠管：

7、用37℃生理盐水缓缓注入肠管，洗去肠管内容物，充分洗净后送入空气使洗涤液尽量流尽。4.作成回路：吸取供试液50mL，从空肠上部进入肠管流经空肠后再流入贮液瓶中，按下图所示作成回路。开动微量输液器记录开始回流时间。5.以5mL/min流速循环10min，记为0时，之后改为2.5mL/min的流速循环并记时。分别于循环0，10，20，30，40，50，60，80，100，120min取样2.0mL经0.45μm的微孔滤膜过滤(1.0mL用于酚红含量测定，1.0mL用于丹皮酚含量测定)，同时补加酚红液(含酚红20μg/mL)2.0mL

8、。（四）样品定量与测定1.酚红定量：样品1.0mL置于10mL容量瓶中加0.2mol/LNaOH溶液至刻度，以0.2mol/LNaOH溶液为空白，558nm测定吸光度。测出样品的吸光度A，以标准曲线算出各样品对应的浓度。2.丹皮酚定量：将1.0mL样品用紫外分光