基于微针给药主动靶向apcs的脂质体经皮疫苗递送系统研究

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1、第二军医大学博士学位论文基于微针给药主动靶向APCs的脂质体经皮疫苗递送系统研究AstudyonvaccinedeliveringsystemofactivepercutaneoustargetingAPCsbymicroneedles专业药剂学研究生杨峰导师高申教授培养单位长海医院药学部第二军医大学长海医院二。一三年五月独钏蝴一恻辨9574工作。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他入已经发表或撰写过的研究成果。与我一同工作的同志对本研究所做的学位论文作者签名：杉崎啡川年岁月猡日学位论文版权使用授权声明本

2、人完全了解第二军医大学有关保留、使用学位论文的规定，第二军医大学有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权第二军医大学可以将学位论文全文或部分内容编入《中国学位论文全文数据库》、《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》等数据库进行检索。可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：劬哼导师签名：日期：幻I；年岁月z箩日日期：日目录摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．1．ABSTRACT

3、⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．．4．英文缩略词⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．：⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．．8．前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．．‘010．月U吾⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．--第一部分：载OVA抗原的DCs靶向免疫脂质体的制备及表征⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．14．1仪器与材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．．1

4、5．1．1仪器⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．．15．1．2材料与试剂⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．16．1．3细胞与动物⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．16．2实验方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．16．2．1载OVA抗原脂质体的制备及表征⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．16．2．1．1载0VA抗原脂质体的制备⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．．16．2．1．2载OVA抗原脂质体的粒径和

5、Zeta电位测定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．17．2．2CDllc单克隆抗体修饰的免疫脂质体的制备及表征⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．17．2．2．1免疫脂质体的制备及纯化⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．17．2．2．2免疫脂质体的粒径和Zeta电位测定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．．18．2．2．3别藻青蛋白标记的CDllc单克隆抗体浓度标准曲线⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．．18．2．2．4免疫脂质体的抗体连接率测定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．18．2．2．5FITC荧光标记的OVA溶液标准曲线的绘制⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

6、⋯⋯．．18．2．2．6免疫脂质体包封率的测定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．18．2．2．7免疫脂质体形态的透射电镜观察⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．19．2．2．8裸鼠离体皮肤的制备⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．19．2．2．9皮肤表面免疫脂质体染色后激光共聚焦观察⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．19．2．2．10小鼠骨髓来源的树突状细胞的培养⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．19．2．2．11免疫脂质体表面连接的单克隆抗体活性的测定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．19．3结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

7、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．20．3．1免疫脂质体的SepharoseCL．4B层析柱纯化⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．20．3．2制备的脂质体及免疫脂质体的外观、粒径及Zeta电位⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．20．+3．3APC标记的CDllc单抗标准曲线的绘制及脂质体连接率测定⋯⋯⋯⋯．．22．3．4FITC．OVA溶液标准曲线的绘制和免疫脂质体包封率的测定⋯⋯⋯⋯⋯．22．4讨{仑⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．．25．5小结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

8、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．26—第二部分：基于微针给药的免疫脂质体经皮促透效果及递送机理研究⋯⋯⋯⋯．27．1仪器与材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．28．1．1仪器⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．28．1．2材料