低聚甘露糖醛酸升高白细胞作用及机理研究

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1、谨以此论文献给我的家人、同事和朋友------李海花低聚甘露糖醛酸升高白细胞作用及机理研究学位论文答辩日期：指导教师签字：答辩委员会成员签字：独创声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含未获得（注：如没有其他需要特别声明的，本栏可空）或其他教育机构的学位或证书使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：签字日期：年月日------------------

2、---------------------------------------------------学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，并同意以下事项：1、学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。2、学校可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同时授权清华大学“中国学术期刊(光盘版)电子杂志社”用于出版和编入CNKI《中国知识资源总库》，授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库

3、》。（保密的学位论文在解密后适用本授权书）学位论文作者签名：导师签字：签字日期：年月日签字日期：年月日低聚甘露糖醛酸升高白细胞作用及机理研究中文摘要白细胞减少症是肿瘤放化疗过程中常见的一种并发症，是指外周血液中的白细胞数目持续低于4³109个/L，临床表现主要以头晕乏力，四肢酸软，畏寒腰酸为主，若不及时治疗可继发严重感染并出现并发症等。因此调节机体抗病能力，特别是抵抗癌治疗后引起的白细胞减少，减少感染的发生率，成为提高抗癌治疗质量的关键性因素。目前，临床上治疗白细胞减少症的药物以维生素类，嘌呤核苷酸类及辅酶类和集落刺激因子治疗为主。上述药物不同程度的存在

4、着疗效不甚理想，价格昂贵，病人难以接受等弊端。因此开发有确切疗效的，价格低廉，且无毒副作用的升高白细胞的药物仍是临床上的迫切需要。褐藻胶是一类具有广泛生物活性的物质，我们在前期的研究中发现，甘露糖醛酸的酶解产物能对抗γ射线引起的小鼠白细胞数量的下降，促进小鼠造血系统的恢复。基上以上原因，本课题筛选了不同分子量的低聚甘露糖醛酸和低聚古罗糖醛酸在升高白细胞方面的活性，确定了升高白细胞作用的最佳有片段为分子量为5800的低聚甘露糖醛酸（以下简称M5800）。进一步以M5800为研究对象，研究其升高的白细胞的作用及机理。本论文主要开展了以下的研究工作：1.首先研

5、究了不同分子量的低聚甘露糖醛酸和低聚古罗糖醛酸的理化性质：以M5800为例：利用硫酸-咔唑法测定了M5800的糖醛酸含量为50.6%；利用HPGPC法测定了其重均分子量及分布系数分别为5.812KDa和1.080；测量了其比旋光度为-69.16°，pH值为6.51。2.以环磷酰胺所致小鼠骨髓抑制模型为药效筛选平台，分别研究了不同分子量的低聚甘露糖醛酸和低聚古罗糖醛酸对小鼠外周血白细胞的影响，并测定了小鼠血清中GM-CSF的水平。结果表明，除分子量为2000的低聚古罗糖醛酸外，其余5个受试药均可不同程度地升高小鼠白细胞数量，同时可不同程度地升高小鼠血清中G

6、M-CSF水平，其中以分子量为5800的低聚甘露糖醛酸的作用最为明显。综合以上二个指标，分子量为5800的低聚甘露糖醛酸活性最强。以环磷酰胺所致小鼠骨髓抑制模型为药效筛选平台，以白细胞和骨髓有核细胞数为观察指标，进一步研究了M5800的升白作用。结果表明，M5800在180mg/kg至540mg/kg范围内，均可明显升高小鼠白细胞数量和骨髓有核细胞数量，与模型组比较有明显差异。3.在细胞水平上研究了M5800升高白细胞的作用机理：（1）利用造血祖细胞体外琼脂培养法，通过体内给药和体外给药二种不同的给药途径，观察M5800对正常小鼠和模型小鼠粒-巨噬系造血

7、祖细胞集落（CFU-GM）增殖分化的影响；采用造血因子生物活性检测法，研究经M5800诱导制备的骨髓基质细胞、脾细胞和胸腺细胞的培养上清液对小鼠CFU-GM增殖分化的影响。结果表明，①M5800能明显促进正常小鼠CFU-GM集落的形成，与空白组比较，有显著性差异。并且在3.125μg/mL到25μg/mL范围内，随着药物浓度的加大，作用也逐渐增强，在25μg/mL时作用达到最大。②M5800体内给药，180mg/kg、360mg/kg和540mg/kg三个剂量组均能明显促进环磷酰胺模型小鼠CFU-GM的数量，与模型组比较，有极显著性差异。③经M5800诱

8、导的骨髓基质细胞培养上清液，可明显促进CFU-GM的形成，在6.25μg/mL到