人参总皂苷对大鼠骨髓间充质干细胞向胰岛样细胞分化的影响

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1、中图分类号：R58硕士学位论文人参总皂苷对大鼠骨髓间充质干细胞向胰岛样细胞分化的影响院（系）、所临床医学院研究生姓名彭红学科、专业内科学导师姓名陈秋教授二Ο一三年四月目录1人参总皂苷对大鼠骨髓间充质干细胞向胰岛样细胞分化的影响…………………………………………………………………11.1中文摘要………………………………………………………11.2英文摘要………………………………………………………41.3前言……………………………………………………………71.4材料与方法……………………………………………………101.5结果……………………………………………………………281.6讨论……………………

2、………………………………………351.7结论……………………………………………………………401.8参考文献………………………………………………………411.9英汉缩略词对照表……………………………………………452致谢……………………………………………………………473骨髓间充质干细胞对1型糖尿病的治疗作用（综述）……48人参总皂苷对大鼠骨髓间充质干细胞向胰岛样细胞分化的影响摘要目的：通过链脲佐菌素（STZ）作用于大鼠胰岛细胞株（INS-1）建立体外大鼠INS-1胰岛细胞损伤模型后，应用Transwell共培养体系与大鼠骨髓间充质干细胞（BM-MSC）间接共培养，同时加入不同浓度的人参总皂

3、苷（TSPG）干预，观察人参总皂苷对BM-MSC向胰岛样细胞分化的影响，并初步探讨其机制。方法：体外分别培养INS-1细胞和BM-MSC，取生长状态良好的INS-1接种于Transwell培养板下层，生长达80-90﹪融合后，用无血清培养基同步化24h，再予不同浓度的STZ干预24h，通过观察细胞形态及丙二醛（MDA）的测定，选择合适的浓度来建立胰岛细胞损伤模型，随即分为5个组：（A）单纯BM-MSC培养组；（B）BM-MSC+INS-1共培养组；（C）BM-MSC+INS-1+低浓度人参皂苷组；（D）BM-MSC+INS-1+中浓度人参皂苷组；（E）BM-MSC+INS-1+高浓度人参皂苷

4、组。各组培养液相同，均为含胎牛血清的50﹪1640培养基+50﹪DMEM-L培养基，其中B、C、D、E组的BM-MSC均接种于Transwell板上层。共培养9天后用双硫腙染色初步鉴定诱导后细胞，并提取诱导后细胞总蛋白及总RNA，用Western-Blot检测各组细胞内PDX-1蛋白含量，用RT-PCR检测特异性胰岛素基因的表达水平。结果：（1）胰岛细胞损伤模型的建立：不同浓度的STZ干预细胞24h后，细胞丙二醛（MDA）含量1逐渐增加，并且在0.8mg/ml的浓度时增加更为显著，呈现出了明显的细胞损伤效应。（2）双硫腙染色鉴定诱导后细胞：单纯BM-MSC培养组不能被染色，其余各组均不同程度

5、地被染为棕黄色，表明诱导后细胞的细胞质中富含锌离子，证实有胰岛素分泌细胞的存在。（3）实验各组PDX-1蛋白表达水平的变化：单纯BM-MSC培养组无PDX-1蛋白的表达，其余各组诱导后细胞均有表达，而其中人参皂苷组较无人参皂苷组表达水平有不同程度的升高，差异具有统计学意义（P＜0.05），且随着人参皂苷浓度的升高，PDX-1蛋白的表达呈现增高趋势。（4）实验各组胰岛素基因表达的变化：单纯BM-MSC培养组无胰岛素基因无表达，其余各组诱导后细胞均有表达，其中人参皂苷组较无人参皂苷组表达水平有不同程度的升高，差异具有统计学意义（P＜0.05），且呈现浓度依耐性。（5）葡萄糖刺激实验：将诱导后细胞

6、分别在含5.6mmol/L和16.7mmol/L葡萄糖的培养基中体外培养2h，采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定上清中的胰岛素水平。单纯BM-MSC培养组细胞培养液上清中无胰岛素释放，而共培养组诱导后细胞在16.7mmol/L高糖浓度刺激后胰岛素释放水平较5.6mmol/L基础糖浓度明显增加（P<0.05）。结论：（1）0.8mg/ml的STZ处理INS-1细胞24h，可以对体外培养的INS-1细胞造成胰岛细胞损伤模型。（2）BM-MSC与INS-1细胞在体外间接共培养的条件下，BM-MSC可以被诱导为胰岛样细胞，并且在高糖刺激下可以分泌胰岛素。（3）人参总皂苷在骨髓间充质干细胞向胰岛样细

7、胞分化过程中具有促进作用，并且在一定范围内具有浓度依耐性。而这种作用可能是通过增2强PDX-1蛋白及胰岛素基因的表达来实现的。关键词：骨髓间充质干细胞；胰岛样细胞；人参总皂苷3Effectsoftotalsaponinsofpanaxginsengonthebonemarrowmesenchymalstemcellsintoislet-likecellsAbstract:Objective:wesetupST