三七总皂苷促进大鼠骨髓间充质干细胞源血管生成

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1、6．rBMSCs联合Matrigel移植在体血管生成实验实验分为空白对照组、实验对照组、tPNS低、中、高浓度组。rBMSCs与冰浴中I拘Matrigel等量混合，取4009l皮下注射于SD大鼠腹前区正中线两侧，空白对照组以等量培养液代替rBMSCs。术后常规喂养，按实验分组腹腔注射血栓通(50ug／l【g，低浓度组：loo,g／l【g，中浓度组；150,g／l(g，高浓度组。)或生理盐水(对照组)。10d终止实验，取出Matrigel移植体，分别测定其血红蛋白含量和VEGF含量，部分种植体组织切片，Masson染色，检测微血管面积。【结果】

2、1．rBMSCs形态学特征及流式细胞术鉴定细胞接种48h，首次换液后，贴壁细胞呈梭形或为体积较大的圆形单个核细胞。4d后，可见纺锤形贴壁细胞。6d后，多个细胞形成集落。传代后，细胞体积增大，呈长梭形，成纤维细胞样。融合的细胞单层呈涡旋状。流式细胞术检测第四代rBMSCs表面抗原，CD29+阳性细胞数为77．1％，CD44+阳性细胞为21．3％，CDl06+和CD45+阳性细胞分别为5．5％和4．O％。2．tPNS对rBMSCs增殖能力的影响。tPNS促进rBMSCs细胞增殖。tPNS刺激细胞48h，浓度从0．03至10099／mL范围内，均有

3、促细胞增殖作用。取1．0I，tg／mL、10．0I．tg／mL和1001,tg／mL为tPNS的低，中，高浓度组。连续检测10d细胞增殖率，结果显示，培养第2至6天，tPNS低，中，高浓度组分别较对照组增高13．7％～36．7％、35．5％,-一65．2％和23．3％～70．8％，均P

4、+63．9pg／mL、802．7+49．3pg／mL和683．7+194．1pg／m。与对照组比较，tPNS低、中、高浓度组细胞培养至第4至10天，VEGF浓度分别较对照组增高20．3％～28．5％，67．9％--一109．3％和101．O％～248．1％，均P<0．01。4．tPNS上调rBMSCs的VEGF基因表达实时荧光定量逆转录PCR检测结果表明，tPNS上调VEGFmRNA水平。与对照组比较，tPNS的低，中、高浓度组分别增高36％、22％和89％，P<0．01或P<0．05。5．tPNS促进rBMSC．ECs体外血管新生第三代rB

5、MSCs用内皮诱导培养液培养，14d后分化为内皮样细胞(rBMSC．EC)，rBMSC．ECs在Matrigel基质胶上培养24h，形成毛细血管样结构。tPNS组管的数量和管的长度均较对照组明显增加。毛细管总长度为对照组的2．17倍(1l上g／mL组)、1．42倍(101xg／mL组)和1．90倍(1001xg／mL组)，P<0．05或P<0．01。6．tPNS促进rBMSCs联合Matrigel移植在体血管生成Matrigel移植体血红蛋白含量：空白对照组Hb含量很低，实验对照组是空白对照组的1．8倍，P

6、分别是实验对照组的1．38倍、1．51倍和1．69倍，均P

7、和蛋白分泌增加。【关键词】三七总皂苷；骨髓间充质干细胞；细胞增殖；血管内皮生长因子；血管新生；大鼠TotalsaponinsofPanaxnotoginsengfacilitatesangiogenesisderivedfromratbonemarrowmasenchymalstemcellsAbstractIObjective】StudyoftheinfluencesandmechamsmoftotalsaponinsofPanaxnotoginseng(tPNS)onangiogenesisderivedfromratbonemarrow

8、mesenchy’malstemcells(rBMSCs)，obtainedthetPNScombinedwithBMSCscontributestotheBMSC