中国卤虫caveolin-1基因克隆及功能初步的研究

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1、，f'j’，≯一学位论文独创性声明本人承诺：所呈交的学位论文是本人在导师指导下所取得的研究成果。论文中除特别加以标注和致谢的地方外，不包含他人和其他机构已经撰写或发表过的研究成果，其他同志的研究成果对本人的启示和所提供的帮助，均已在论文中做了明确的声明并表示谢意。学位墓文作者签名：i叁麴学位论文版权的使用授权书本学位论文作者完全了解辽宁师范大学有关保留、使用学位论文的规定，及学校有权保留并向国家有关部门或机构送交复印件或磁盘，允许论文被查阅和借阅。本文授权辽宁师范大学，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库并进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存

2、、汇编学位论文，并且本人电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。保密的学位论文在解密后使用本授权书。学位论文作者签名：指导教师签名：签名El期：砂，1年衫月秽-日1＼j、·?0辽宁师范大学硕士学位论文摘要窖蛋白是细胞膜上特殊内陷结构胞膜窖的标志性蛋白，其主要功能是调节细胞信号转导。窖蛋白．1(Caveolin．1)是构成胞膜窖的主要组成成分。其蛋白质结构中的脚手架区的氨基酸序列高度保守，可以募集内皮细胞生长因子，内皮细胞一氧化氮合酶，G．蛋白，活化的Src家族蛋白激酶和蛋白激酶C等信号分子，并导致下游的信号转导被抑制或者激活。卤虫(Artemia)隶属于节肢动物门

3、，甲壳纲，鳃足亚纲，无甲目，卤虫属，是一种生活在高盐海水或内陆盐湖，适应性极强的小型甲壳动物。卤虫以卵胎生的生殖方式繁殖，但在环境胁迫的极端环境下也通过卵生的方式产生休眠卵或称滞育卵。也正因为如此，休眠胚胎滞育的打破和胚胎发育的过程已成为发育生物的研究热点。本文采用RACE技术扩增了中国卤虫(Artemiasinica)caveolin．J基因的全长序列，并对得到的序列进行了生物信息学分析。用Real．time实时定量PCR定量分析各发育时期和不同环境压力条件下caveolin—J表达量的变化，进而分析卤虫caveolin．J基因的功能。结果如下：(1)通过实验

4、，我们得到长974bp的卤虫caveolin．J基因的全长序列，完整开放阅读框大小为672bp。(2)经生物信息学分析，ORF区编码了一个含224个氨基酸残基的蛋白质，预测分子量为25．4KDa，理论等电点为5．48。(3)卤虫胚胎发育不同时期，不同盐度和菌刺激对卤虫的胁迫实验显示，在0小时，caveolin—J呈高表达；高盐浓度和菌刺激的条件下基因有上调趋势。(4)推测卤虫caveolin．J可能具有参与先天性免疫并参与胚胎发育和调控细胞周期的功能。关键词：中国卤虫；caveolin．J『基因克隆；胚胎发育；先天性免疫。◆．，’●●■1●J～f0中国卤虫cav

5、eolin．J『基因的克隆及功能的初步研究Cloningand。。‘studyonfunctionofcaveolin一1Gene。Artem"lonmganpreliminarystudy0ntunctmnOtcaveolineneinArtemta—sinicaAbstractCaveolinsarethesignatureproteinsofspecializedinvaginationsoftheplasmamembranenamedeaveolae，whichfunctiontoregulatesignaltransductionwithinthece

6、ll．Caveolin-1isaprincipalstructuralcomponentofcaveolae．TheaminoacidsequenceofCaveolin-1scaffoldingdomainallowsthisproteintointeractandinhibitoractivate晰tllsignallingmoleculessuchasepidermalgrowthfactorreceptor,endothelialnitric-oxidesynthase，G-proteins，e-Sre—likekinases，proteinkinase

7、C．ArtemiasinicabelongstoPhylumArthropoda，ClassCmstacea,SubclassBranchiopoda,OrderAnostaca,FamilyArtemiidaeandGenusArtemiartemia．Itiswidelydistributinginsalternsandsaltlakesandpowerfuladaptationtoextremeenvironments．Artemiacangivingbirthtonaupliibytheovoviviparouspathway,butreleasesen

8、cystedembryo