gnrh主动免疫对下丘脑—垂体—性腺—胸腺环路的调节机制

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1、分类号：墨9281苎g!垒：!单位代码：密级10364窟微震业大学学位论文GnRH主动免疫对下丘脑一垂体一陛腺一胸腺环路的调节机制TheregulationofactiveimmunizationagainstGnRHonhypothalamus--pituitary··gonadalthymusloop研究指导教申请学位门类级别：壅堂逮±答辩委员会主席：二零一三年六月名方学业究在专研所AnhuiAgriculturalUniversityPh．D．DissertationTheregulati

2、onofactiveimmunizationagainstGnRHOilhypothalamus--pituitary·-gonadalthymusloopPh．D．candidate：SuShi—pingSupervisor：Prof．ZhangXiao—rongCo-director：Associateprof．FangFu．guiCollegeofAnimalScienceandTechnology,AnhuiAgriculturalUniversity，Hefei，Anhui，China

3、June,2013本项研究受下列基金资助1．“国家重点基础研究发展计划项目(“973计划”项目，编号：200908941004)2．安徽省自然科学基金项目(项目编号：1208085M039)3．高等学校博士学土点专项科研基金博导类资助课题(项目编号：20123418110004)SUPPORTEDBY1．TheNationalBasicResearchProgram(973Program，NO．2009CB941004)2．AnhuiProvincialNaturalScienceFoundat

4、ion(NO．07041015)．3．TheDoctoralProgramofHigherEductionFoundation烈0．20123418110004)独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得安徽农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文巾作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：——

5、时间：年月日关于论文使用授权的说明本人完全了解安徽农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意安徽农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。研究生签名：——时间：年月日第一导师签名：——时间：年月日安徽农业大学博士学位论文摘要GnRH主动免疫对下丘脑一垂体一I生腺一胸腺环路的调节机制目的：本研究通过对不同年龄的sD雄性大鼠进行GnRH主动免疫并结合体外培养

6、下丘脑神经元及胸腺细胞，探索GnRH主动免疫对下丘脑一垂体一性腺一胸腺环路的作用及其调节机制。方法：(1)将人工合成的GnRH并列休偶联在卵清蛋白载体上，辅以铝胶佐剂，分别对照组和免疫组的18～20d、28d和8月龄SD大鼠按looI．tg／只多点皮下注射，每两周加强免疫一次，共免疫3次。(2)在最后一次免疫后，每2周尾静脉采血，用酶联免疫吸附法(ELESA)检测血清中GnRH特异性抗体；2个月后，多聚甲醛溶液心脏灌注，取下丘脑、睾丸、精囊腺和前列腺，分别称重，对睾丸组织切片和HE染色，分析Gn

7、RH主动免疫对不同年龄大鼠睾丸和部分附性腺的形态影响；分别对下丘脑进行组织匀浆和冰冻切片，ELISA检测匀浆液上清中GnRH浓度；免疫荧光双染法观察GnRH主动免疫后GnRH神经元和胶质细胞的分泌活性。(3)在28d大鼠最后一次加强免疫后1个月和2个月时，每组麻醉处死6只大鼠，取全血和胸腺，并培养大鼠胸腺原代细胞，添加GnRtt受体拮抗剂；用C1)3、CD4、CD8和CD25直标荧光抗体标记血液和胸腺组织细胞中T淋巴细胞，流式绌胞仪检测血液和胸腺中T淋巴细胞的分型变化。(4)28d大鼠在最后一次

8、加强免疫后每2周每组麻醉处死8只，心脏取血，离心制备血清，左侧胸腺组织匀浆取上清，放射免疫法(RIA)检测FSH、LH，ELISA检测GnRH；大鼠右侧胸腺组织和胸腺原代培养细胞液氮冻存，实时荧光定量PCR检测胸腺组织中FSHR、LHR、AR和GnRHR的mRNA表达，并在免疫1个月和两个月时，每组取4只大鼠胸腺用多聚甲醛固定，免疫组织化学染色，检测上述生殖激素受体在胸腺内的定性表达和蛋白水平。(5)取28d试验大鼠下丘脑和血清，ELISA检测下丘脑组织上清中GnRH和Thymulin及血清中T