cd200基因转染的人胎盘间充质干细胞对异基因小鼠皮肤移植免疫排斥调节作用的研究

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1、分类号：R4单位代码：10752密级：公开学号：2010145宁夏医科大学硕士研究生学位论文CD200基因转染的人胎盘间充质干细胞对异基因小鼠皮肤移植免疫排斥调节作用的研究ImmunomodulatoryEffectsofCD200GeneTransfectedHumanPlacenta-DerivedMesenchymalStemCellsonImmuneRejectioninMouseAllogenicSkinTransplantation学位申请人：王琼指导教师：李玉奎教授申请学位门类级别：医学专业名称：临床检验诊断学研究方向：干细胞生物学所在学院：检验学院论文完成日期：二〇一三年

2、四月宁夏医科大学研究生学院NingxiaMedicalUniversityThesisforApplicationofMaster’sDegreeImmunomodulatoryEffectsofCD200GeneTransfectedHumanPlacenta-DerivedMesenchymalStemCellsonImmuneRejectioninMouseAllogenicSkinTransplantationStudent’sName:WangqiongSupervisor:LiYukuiprofessorSubjectCategory:MedicalscienceSpecia

3、lty:ClinicalLaboratoryDiagnosticsMajor:StemcellbiologyCollege:LaboratoryCollegeCompletionDate:Apr.2013宁夏医科大学学位论文独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是个人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果，无抄袭及编造行为。除文中已经特别加以注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明并致谢。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。论文作者签名＿＿＿＿＿论文导师签名＿＿＿＿＿年月日年月

4、日宁夏医科大学关于学位论文使用授权的声明宁夏医科大学有权保留使用本人学位论文，同意学校按规定向国家有关部门机构送交论文的复印件和电子版，允许被查阅和借阅。本人授权宁夏医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复印手段保存和汇编本学位论文。可以公布（包括刊登）论文的全部或部分内容。（保密论文在解密后应遵守此规定）论文作者签名＿＿＿＿＿论文导师签名＿＿＿＿＿年月日年月日宁夏医科大学硕士研究生学位论文中文摘要CD200基因转染的人胎盘间充质干细胞对异基因小鼠皮肤移植免疫排斥调节作用的研究摘要目的研究CD200基因转染的人胎盘间充质干细胞（HPMSC

5、s）对异基因小鼠皮肤移植免疫排斥调节的作用，为进一步阐明CD200基因的免疫调节机制提供新线索。为了在动物模型中进行这一研究，在本课题中我们将用表达小鼠CD200基因的人胎盘间充质干细胞代替人CD200阳性间充质干细胞亚群，并将研究结果作为后续的直接用人CD200阳性人胎盘间充质干细胞亚群作人体条件的研究提供依据。方法构建表达小鼠CD200基因的重组腺病毒载体，并用此载体转染人胎盘间充质干细胞，建立表达小鼠CD200基因的人胎盘间充质干细胞。待表达小鼠CD200基因的胎盘间充质干细胞长至60~70%密度的时候，用Triple消化成单细胞悬液。选择40只C57BL/6小鼠作为受体，以Vr:

6、CD1(ICR)乳鼠皮肤作为供体，建立小鼠异基因皮肤移植排斥模型。C57BL/6小鼠随机分为4组：①A组（空白对照组1）：C57BL/6小鼠自体皮肤移植；②B组（对照组2）：同种异基因移植+PBS尾静脉注射；③C组（对照组3）：同种异基因移植+HPMSCs尾静脉注射；④D组（实验组）：同种异基因移植+表达小鼠CD200的HPMSCs尾静脉注射。检测项目包括：移植皮片存活时间，HE染色观察移植皮片病理改变，术后7d受体小鼠血液白细胞数量，腹腔液巨噬细胞活化率，ELISA、RT-PCR方法检测受体小鼠血液、脾脏中IL-4、IL-17及IFN-γ表达量的变化。结果(1)经PCR、酶切、测序及G

7、FP表达证实携带CD200基因的重组腺病毒载体rAd-4-mCD200构建成功。(2)GFP、Real-TimePCR检测rAd-4-mCD200转染的人胎盘间充质干细胞可以成功表达mCD200基因。(3)皮肤移植术后7d，移植皮片存活情况观察C组较B组移植皮片存活时间延长（p＜0.001）；D组较B组和C组移植皮片存活时间延长（p＜0.001，p＜0.001）。HE染色结果显示，D组较B组小鼠皮肤炎细胞Ⅰ宁夏医科大学硕士研究生学位