大鼠骨髓间充质干细胞培养及体外诱导向神经元样细胞分化的研究

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1、中图分类号UDCR764610硕士学位论文学校代码!Q53圣密级公珏大鼠骨髓间充质干细胞培养及体外诱导向神经元样细胞分化的研究Thestu#ofculturedandinducedtodifferentiateintoneuron—likecellsofRatBoneMarrowMesenchymalStemCellsinvitro作者姓名：学科专业：研究方向：学院(系、所)：指导教师：秦华丽临床医学耳鼻咽喉科学中南大学湘雅三医院蒋明副教授答辩委员会中南大学2013年5月原创性声明1111111I

2、IIIIIIlUUll111IIIIllIIlY2425744本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：丕留乃关于学位论文使用授权说明本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以

3、公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文；学校可根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文。作者签名：』超导师签名l至互一日期：丝!三年上月塑大鼠骨髓间充质干细胞培养及体外诱导向神经元样细胞分化的研究摘要：目的：建立SD大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)体外培养体系，诱导分化为神经元样细胞，筛选较好的体外诱导方法，为下一步内耳移植实验提供前期研究基础。方法：1．BMSCs培养：主要采用全骨髓直接贴壁法培养BMSCs并传代，取P3代行流式细胞仪检测BMSCs表面标志CD2

4、9，CD90及造血细胞表面抗原CD45的表达。2．取P4代BMSCs，由碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)预诱导24h后，分别加入：A组诱导剂：神经营养素3(NT-3)，维甲酸(RA)；B组诱导剂：B．硫基乙醇03MZ)。诱导1h，5h，24h，7d，14d，21d后，采用细胞免疫荧光方法鉴定，检测成熟神经元标志物神经元特异性烯醇化酶(NSE)的表达情况，观察两组是否有染色阳性的神经元样细胞及比较阳性率的高低。结果：1．全骨髓贴壁筛选法简便，所获得的细胞数量多，增殖分化快。2．流式细胞仪检测BMS

5、Cs表达CD90、CD29；不表达CD45，结合细胞形态分析，符合BMSCs的特征。3．细胞免疫荧光结果示NSE阳性表达’A组诱导分化为神经元样细胞的阳性率明显高于B组。结论：1．全骨髓贴壁筛选法分离培养的BMSCs所获得的细胞数量多，增殖分化快，纯度高。2．采取分步诱导和联合诱导BMSCs，由bFGF预诱导24h后，换用NT-3+RA诱导分化为神经元样细胞NSE阳性率明显高于BME诱导，是一种比较好的诱导方案。图5幅，表1个，参考文献97篇。关键词：骨髓间充质干细胞；诱导方法；神经元样细胞；内耳

6、移植分类号：R764IIThestudyofculturedandinducedtodifferentiateintoneuron—likecellsofRatBoneMarrowMesenchymalStemCellsinvitroABSTRACT：⋯。一。‘‘．1l‘‘‘^一一0bjectiveEstablishingtrainingsystemofSDratbonemarrowmesenchymalstemcells(BMSCs)andscreeningoutabeRermethodfori

7、nducingBMSCsdifferentiateintoneuron．1ikecellsinvitro．SOastolaythefoundationforthenextexperimentsofinnereartransplantation．MethodFirst，culturedBMSCs：First，BMSCswereculturedandsubculturedbythemainmethodofwholebonemarrowdirectlyadherentinflasks．andBMSCso

8、fthethirdgenerationusedforflowcytometricdetectionaboutthesurfacemarkersCD29．CD90ofBMSCsandthesurfaceantigenCD45ofhematopoieticcell．Second，BMSCsofthefourthgenerationwerepre．induced24hbybasicfibroblastgrowthfactor(bFGF)，andthendividedinto2groups