吗啡戒断时erk活化机制研究

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1、AthesissubmittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMasterThestudyofERKactivationmechanismofmorphinewithdrawalBy：WenJieLiSupervisor：Prof．ZhangQiPharmacology一一SchoolofPharmaceuticalscienceApril，2013原创性声明IMIIIIIrlllJllllllIMlJllrllrrlrifrlrlfY2314102本人郑重声

2、明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者：日期：年月日学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑卅I大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州大学可

3、以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学位论文作者：日期：年月本研究由以下基金资助1．国家自然科学基金(No．30800328)2．河南省高校科技创新人才支持计划项目(No．10PTGS48)摘要吗啡是阿片类镇痛药的典型代表，多次使用易出现药物耐受与依赖的现象，当突然停用或使用药物的受体拮抗剂会产生一系

4、列戒断症状，这是戒毒后短时间内出现复吸的主要原因之一。因而，研究如何减缓吗啡耐受及消除戒断症状具有重要的临床意义。然而，虽然对吗啡耐受及戒断已经进行了大量的研究，但是其分子机制仍然不是十分清楚。近年来，通过MAPK激酶磷酸化转录因子从而导致靶基因表达的改变被假定参与了吗啡耐受与戒断的过程，但是对其过程中ERKl／2活性的变化尚未有详细的报道。ERKl／2是丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)家族的一员，是将信号从表面受体传导至细胞核的关键，由其介导的胞内信号转导，在细胞分化，生长发育，神经元可塑性及多种生

5、理病理过程中发挥重要作用。其信号转导途径为Ras／Raf／MEK／ERK途径。鉴于此，首先研究了血清对SH-SY5Y细胞ERKl／2，JNK，p38活性的影响，发现血清对纳洛酮催促吗啡戒断SH．SY5Y细胞ERKl／2，p38，JNK磷酸化影响较大，而serum．starved10h后不影响SH．SY5Y细胞的活性与形态。因此，我们接下来的实验均采用serum．starved10h的方法进行。为系统研究吗啡戒断时ERK变化机制，我们首先探讨了急性吗啡，慢性吗啡及吗啡戒断时ERKl／2磷酸化的变化。研

6、究发现急性给予吗啡上调ERKl／2蛋白磷酸化水平，应用MEK和PKA抑制剂均可拮抗其升高，提示急性吗啡可通过Ras／Iia价压K，ERK通路，cAMP／PKA通路调控ERKl／2蛋白。相反，慢性吗啡则下调ERK磷酸化水平。接着发现纳洛酮催促吗啡戒断5．10min时能引起ERK磷酸化水平瞬时升高，并且应用大剂量MEK抑制剂(109M)和PKA抑制剂均只能部分拮抗ERK的活性。由于表皮生长因子受体(EGFR)可通过Ras／I己删MEK／ERK通路和EGFR／P13K／Akt／ERK通路激活下游的ERK蛋

7、白。我们推测吗啡戒断过程可能是激活了EGFR／P13K／Akt／ERK通路来调控ERK的活化。为进一步探讨机制，我们研究了Na+／K+．ATP酶抑制剂对吗啡依赖与戒断的作用。Na+／K+．ATP酶在吗啡依赖和躯体戒断过程中的活性变化也得到多个课题组的证实，而Na+／K+．ATP酶活性变化可影响信号分子ERKl／2的活性。我们前期研究也发现，Na+／K+．ATP酶抑制剂地高辛能够通过抑制吗啡戒断过程中ERK摘要的活性来缓解动物吗啡戒断症状，但这仅是在动物水平上的研究结论，Na_／K+．ATP酶抑制剂对

8、吗啡依赖与戒断细胞模型中ERKl／2活性的影响至今尚未有报道。我们在细胞模型上发现，单纯给予地高辛或哇巴因均上调ERKl／2磷酸化水平。最大剂量的地高辛(10州)能够协同急性吗啡上调ERKl／2蛋白磷酸化水平，MEK或PKA抑制剂能拮抗其协同作用；地高辛或哇巴因均能拮抗慢性吗啡引起的ERKl／2蛋白磷酸化水平下调，MEK或PKA抑制剂使其拮抗作用消失或减弱。纳洛酮催促戒断时，10州地高辛或O．1．1山哇巴因能够抑制戒断引起的ERKl／2蛋白磷酸化水平升高。综上所述，吗