同种移植急性排斥反应中pim2的作用及机制研究

同种移植急性排斥反应中pim2的作用及机制研究

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1、分类号:R392.4密级:单位代号:10422学号:200712732博士学位论文论文题目:同种移植急性排斥反应中Pim2的作用及机制研究THEROLEANDMECHANISMOFPIM2INACUTEALLOTRANSPLANTATIONREJECTIoN作者姓名学院名称专业名称指导教师合作导师刘红涛医学院免疫学侯桂华教授2013年4月9日原创性声明本人郑重声明:所呈交的学位论文,是本人在导师的指导下,独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外,本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究做出重要贡献

2、的个人和集体,均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。论文作者签名:皇i卑日期:≯D膨.岁.,么关于学位论文使用授权的声明本人完全了解山东大学有关保留、使用学位论文的规定,同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅;本人授权山东大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或其他复制手段保寸论文和汇编本学位论文。(保密论文在解密后应遵守此规定)论文作者签名:童监三车导师签名:日期≥。I雩.f,,么目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯10符号说明⋯⋯OQI⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯22序言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯24第一部分Pim2在小鼠同种移植急性排斥反应中的动态表达前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯26日U舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯Zb材料和方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯28一.实验材料⋯OO⋯⋯⋯⋯OIQIOIO⋯OOOIB

4、I⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯28二.实验仪器⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯0gIo⋯⋯⋯⋯⋯alIO⋯⋯⋯⋯33三.实验方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯341.建立小鼠同种皮肤移植模型⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯342.RT—PCR分析pim2基因在同种移植急性排斥高峰期的表达⋯⋯⋯⋯⋯⋯353.免疫组化技术研究Pim2蛋白在同种皮肤移植模型中的表达⋯⋯⋯⋯⋯374.WesternBlot研究同种移植排斥反应过程中Pim2蛋白的动态表达⋯⋯39实验结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯OO⋯⋯⋯⋯⋯411.

5、成功建立小鼠同种及同系皮肤移植模型⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯412.pim2基因在同种移植急性排斥高峰时的表达状况⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯413.同种排斥组与同系对照组脾和移植皮片的病理学表现及Pim2蛋白的原位表达状况⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯424.Pim2蛋白在同种移植排斥反应过程中的动态表达状况⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯42讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯43第二部分抑制pint2基因表达对同种移植物存活的影响前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯46月U舌⋯⋯

6、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯46材料和方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯OQ⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯48一.实验材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯48二.实验仪器⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯49三.实验方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯511.确定pim抑制剂4a对pim2抑制的最适浓度和时间⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯512.T细胞中的pim2被4a抑制后对T细胞介导的同种移植急性排斥的影响513.同种反应性T细胞中pim2作用及信号通路分

7、析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯524.同种移植排斥高峰期脾CD4+CD25一T细胞和CD4+CD25+T细胞pim2mRNA表达分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯54实验结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯551.pim抑制剂4a抑制pim2的最佳浓度和最适作用时间⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯552.pim抑制剂4a抑制T细胞pim2后对同种移植物存活的影响⋯⋯⋯553.同种反应性T细胞中pim2的作用及通路⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯564.同种移植急性排斥高峰期受体小鼠脾CD4+CD25-T细胞和CD4+CD2

8、5+T细胞pim2表达状况⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯56讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯57第三部分Pim2对同种抗原诱导的CD4+CD2

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