海洋致病菌现场检测技术的研究

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1、分类号：____________O61密级：______________公开ＵＤＣ：____________546单位代码：______________11646硕士学位论文论文题目：海洋致病菌现场检测技术的研究学号：_________________________15111072293姓名：_________________________宋信信专业名称：________________________无机化学学院：_________________________材料科学与化学工程学院指导教师：________

2、_________________郭智勇教授论文提交日期：2018年6月25日AThesisSubmittedtoNingboUniversityfortheMaster’sDegreeStudiesonlivedetectiontechniqueformarinepathogenCandidate：XinxinSongSupervisors：ProfessorZhiyongGuoFacultyofMaterialScienceandChemicalEngineeringNingboUniversityNingbo3

3、15211，ZhejiangP.R.CHINADate:June25,2018海洋致病菌现场检测技术的研究摘要本论文对海洋致病菌、金标银染技术、二维类石墨烯材料、电化学发光和阳极溶出法做出了系统性阐述。二维结构的纳米材料，如：氧化石墨烯、氮化碳等，具有比表面积大、化学性质单一且表面富含官能团等优点。它们被广泛运用于生物医学和分析检测领域。本论文将二维纳米材料与高灵敏的金标银染技术、阳极溶出法相结合，开发了一系列简单、价廉的免疫传感器。为进一步发展新型海洋致病菌现场检测方法奠定了坚实的基础。具体内容如下：1、基于“圣诞

4、树式”GLSS的VP可视化检测本章基于多功能化的g-C3N4材料，制备了一种“圣诞树式”放大模式的免疫传感器。该方法实施过程如下：捕获抗体被固定在固相支持物上，随后，加入待检样品，然后加入带有AuNPs@g-C3N4的检测抗体。最后通过银染沉积的方式，测定银染信号的强弱。银染信号可通过Matlab程序换算成相应的灰度值。G-C3N4具有较大的比表面积，其表面可携带大量的AuNPs，从而增加检测抗体上信号物的数量，这为设计该免疫传感器提供了基础。最佳条件下，本传感器最低检测限低于102cfu/mL，灵敏度是传统GLSS

5、的100倍左右。该传感器具有简单、价廉、结果可凭肉眼识别等优点。更要的是，本方法无需大型仪器和配备专门的检测人员。所以，基于“圣诞树式”GLSS的VP可视化检测方法为高灵敏现场检测海洋致病菌提供了新思路。2、法拉第笼式电化学免疫传感器检测副溶血性弧菌基于“法拉第笼式”免疫模式并结合阳极溶出伏安技术，本章开发了一种高灵敏检测VP的电化学免疫传感器。AgNPs@GO作为标记物被标记在二抗上作为检测单元。捕获抗体、VP与检测单元的免疫反应在磁性玻碳电极上进行。该传感器灵敏度较高，原因如下：（1）GO具有较大的比表面积，可承

6、载大量的AgNPs，所以检测单元的标记物增多，信号自然加强；（2）本章采用了“法拉第笼式”免疫模式，如此，检测单元中负载在GO上的AgNPs都可发射信号。最优条件下，该传感器的响应电流与VP浓度的对数在102-108cfu/mL之间I线性良好，检测限为33cfu/mL。同时该传感器在海水和海鲜食品中也有良好的表现，所以该免疫传感器可以对食品中的VP进行实时监测。3、基于FSSV和ECL技术的双通道免疫传感器检测创伤弧菌基于多功能化g-C3N4，本章开发了一种检测创伤弧菌的双通道免疫传感器。本章合成了AgNPs@g-C

7、3N4复合物，并在检测抗体上标记AgNPs@g-C3N4作为检测单元。AgNPs@g-C3N4不仅可作为FSSV的溶出信号物，而且可发射ECL信号。高能电子会使g-C3N4发生钝化，AgNPs可俘获和储存高能电子，所以AgNPs@g-C3N4与g-C3N4相比，表现出强且稳定的ECL活性。本研究采用FSSV作为溶出方法，与普通ASV相比，FSSV的高扫描速率可放大信号，从而提高灵敏度。最优条件下，该免疫传感器对VV的检测范围为10-105cfu/mL，LOD=3cfu/mL。同时，该免疫传感器也获得了良好的稳定性，重

8、现性和精确性。关键词：电化学发光免疫分析，“法拉第笼式”电化学传感器，多功能化氧化石墨烯，副溶血弧菌，金标银染技术IIStudiesonlivedetectiontechniqueformarinepathogenAbstractAreviewonmarinebacteria,goldlabelsilverstain(GLSS),andanod