人结直肠腺癌预警和早期筛查的甲基化分子标志物的研究

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1、中图分类号：R36;R730硕士学位论文人结直肠腺癌预警和早期筛查的甲基化分子标志物的研究院（系）、所基础医学院研究生姓名郭晶晶学科、专业病理学与病理生理学导师姓名肖秀丽教授二Ο一三年四月目录人结直肠腺癌预警和早期筛查的DNA甲基化分子标志物的1研究……………………………………………………………11.1中文摘要………………………………………………………11.2英文摘要………………………………………………………31.3前言……………………………………………………………61.4材料与方法………………………………………………

2、……91.5结果……………………………………………………………231.6讨论……………………………………………………………301.7结论……………………………………………………………371.8参考文献………………………………………………………381.9英汉缩略词对照表……………………………………………462致谢……………………………………………………………47RASSF1A基因与结直肠癌关系的研究进展（综述）3…………………………………………………………………481人结直肠腺癌预警和早期筛查的DNA甲基化分子标志物的研

3、究摘要目的：研究表明抑癌基因启动子区CpG岛的甲基化导致抑癌基因表达失活是导致肿瘤发生的机制之一。本实验旨在通过研究结直肠腺癌、腺瘤患者及正常人中P16基因和Ras相关结构域家族1A（RASSF1A）基因的启动子区的甲基化状态，并探讨其临床病理意义，为临床应用这些指标预警、早期筛查结直肠腺癌及预测预后积累可靠资料。方法：收集结直肠腺癌、腺瘤患者及正常人外周血标本，采用酚-氯仿法提取样本DNA，然后用巢式甲基化特异性PCR的方法检测P16基因和RASSF1A基因的启动子区的甲基化状态，并探讨其与临床病理参数的相关性。结果

4、：1、结直肠腺癌组、腺瘤组、正常组外周血标本中P16基因启动子区甲基化阳性率分别是45.45%(15/33)、34.48%(10/29)、12.5%(3/24)，差异有统计学意义2（χ=6.746，P＜0.05）；结直肠腺癌组、结直肠腺瘤组、正常组RASSF1A基因启动子区甲基化阳性率分别是27.27%（9/33）、24.14%（7/29）、0%，2差异有统计学意义（χ=7.709，P＜0.05）。但是两基因启动子区甲基化阳性22率在腺癌组与腺瘤组间差异无统计学意义（χ=0.772，P＞0.05；χ=0.079，P＞0

5、.05）。2、结直肠腺癌组外周血标本中P16基因启动子区甲基化阳性率在高、中、低分化组中分别是27.14%、56.25%、100%，显示高、中分化2组明显低于低分化组，差异有统计学意义（χ=7.622，P＜0.05）；结直肠腺癌组外周血标本中RASSF1A基因启动子区甲基化阳性率在高、中、低分化组中分别为14.29%、25%、100%，显示高、中分化组明显低于低分化组，22差异有统计学意义（χ=9.232，P＜0.01）。结直肠腺癌组外周血标本中P16基因、RASSF1A基因启动子区甲基化阳性率在不同性别、年龄、浸润深

6、度、淋巴结转移、Dukes分期间无统计学意义(P＞0.05)；腺瘤组外周血标本中P16基因、RASSF1A基因启动子区甲基化阳性率与性别、年龄等因素无相关性(P＞0.05)。3、P16与RASSF1A两基因启动子区甲基化状态无相关性(P＞0.05)。结论：1、P16基因与RASSF1A基因在结直肠腺腺癌组、腺瘤组中存在异常高甲基化，阳性率较正常组明显增高，提示P16基因与RASSF1A基因的异常高甲基化可能参与结直肠腺癌的发生发展。2、在结肠腺瘤组P16基因与RASSF1A基因亦存在较高的表达，与结肠腺癌组比较无明显差

7、异，提示P16基因与RASSF1A基因启动子区甲基化可能是结直肠肿瘤发生的早期事件。3、P16基因与RASSF1A基因的启动子区的甲基化状态可能与肿瘤的分化程度相关。4、P16与RASSF1A两基因启动子区的甲基化状态无相关性，提示它们可能是结直肠腺癌发生发展的独立危险因素。5、结直肠肿瘤患者P16基因与RASSF1A基因的启动子区的甲基化状态的检测，为结直肠肿瘤的进一步研究提供了依据，同时为临床应用这些指标预警、早期筛查结直肠腺癌积累了资料。6、DNA甲基化的可逆性，可能成为结直肠癌治疗提供新的靶点。关键词：结直肠；

8、腺癌；腺瘤；甲基化；巢式甲基化特异性PCR；P16；RASSF1A3StudyontheDNAmethylationmolecularmarkersofwarningandearlyscreeninginhumancolorectaladenocarcinomaAbstract:Objective:It’sprovedthatpr