丙酮酸盐对大鼠小肠缺血再灌注引起的肠屏障损伤的保护作用及机制的研究

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1、河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师(或指导小组)的指导下，由本人独立完成。本学位论文研究所获得的研究成果，其知识产权归河北医科大学所有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学位论文主要内容相关的论文，第一署名单位为河北医科大学，试验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。否则，承担相应的法律责任。研究生签名：样去彩导师签章：Z口日研究生学位论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特别加以标注等内容外，文中不包含其他人已发表或撰写的研究成果，

2、指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。研究生签名：挥己厉、导师签章：2叫夕年乡月zdEt目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯4研究论文丙酮酸盐对大鼠小肠缺血再灌注引起的肠屏障损伤的保护作用及机制的研究前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．8一刖舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．⋯材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯9结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．1

3、5附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．19附表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一24讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．27结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯“⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．31参考文献⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．32综述缺氧诱导因子1干预缺血再灌注损伤的研究进展⋯⋯⋯⋯⋯37致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．45个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．46中文摘要丙酮酸盐对大鼠小肠缺血再灌注引起的肠

4、屏障损伤的保护作用及机制的研究摘要目的：近年来的研究发现静脉或肠内给予丙酮酸钠能够减轻烧伤和失血性休克等引起的肠屏障损伤和远隔器官功能障碍，但是其潜在的机制尚不清楚；最近的研究证实丙酮酸盐能够增加缺氧诱导因子1(肼．1)的表达，减轻缺血再灌注(I瓜)引发的器官组织损伤。因此，本研究假设丙酮酸可能通过上调肠I／R时HIF．1信号通路及其下游靶基因的表达，影响肠上皮细胞的屏障功能。本研究目的：1．采用空肠袋缺血再灌注模型，比较丙酮酸盐溶液、葡萄糖溶液和枸橼酸盐溶液对I爪引起的肠屏障损害的保护作用；2．研究肠I／R时丙酮酸盐通过上调HIF．1及其

5、下游靶基因的表达、影响肠上皮细胞紧密连接蛋白Z0．1表达的机制。方法：1实验动物及分组：120只清洁级大鼠，体重2209-2609，购入后适应性饲养1周。术前12小时禁食，自由饮水。实验动物随机分为①正常对照组(S组)②丙酮酸钠组(IP组)③葡萄糖组(IG组)④枸橼酸钠组(IC组)⑤生理盐水对照组(IS组)；分三个时间点：缺血30min(130)、缺血60min(160)和缺血60min后再灌注30min(R30)，每个时间点8只大鼠。2大鼠肠袋IfR模型：盐酸氯胺酮注射液与速眠新II注射液按体积比2：1混合，0．5mL／kg腹部注射麻醉后

6、，用保温毯维持体温在37℃左右。在麻醉状态下沿腹白线行无菌开腹手术，游离屈氏韧带远端5cm的空肠，制作8cm大小的肠袋，近端置入激光多普勒血流仪用丝线结扎固定，远端结扎，往肠内灌注入液体(生理盐水、丙酮酸钠溶液10mmol／L、葡萄糖溶液10mmol／L或者枸橼酸钠溶液10mmol／L)，行肠系膜上动脉分离，用无伤动脉夹夹闭肠系膜上动脉起始部，夹闭30min或者60min，或者夹闭60min后恢复血流30min，制成本模型的三个时间点。在夹闭肠系膜上动脉后，130、160和R30检测肠粘膜血流量。实验终点通过腹主动脉放血法处死大鼠。正常对照

7、组进行手术操作，制作肠袋，不夹闭肠系膜上动脉。指标检测与方法：①肠黏膜损伤形态学观察和评分；②测定小肠黏膜屏中文摘要障功能指标二胺氧化酶(DAO)；③小肠黏膜屏障功能指标：采用免疫荧光双标法标记和激光共聚焦显微镜观察肠上皮细胞紧密连接蛋白ZO-1的形态变化；④Westemblot方法检测肠组织ZO-1、HIF．1、丙酮酸脱氢酶激酶(PDKl)及促红细胞生成素(EPO)表达；⑤测定诱生型和内皮型一氧化氨合酶(iNOS和eNOS)，一氧化氮(N0)；⑥激光多普勒血流仪监测肠黏膜血流量(IMBF)；⑦肠组织过氧化指标：丙二醛(MDA)含量、黄嘌呤

8、氧化酶(XOD)活性和过氧化氢(H202)；结果：1肠黏膜损伤病理评分，各组在肠系膜上动脉夹闭后，出现明显的损伤，各时间点绒毛损伤不一样，p组在各个时间点的绒毛损伤明显较其他各组