mirna-449a在肺癌细胞株中的表达及其生物学功能研究

《mirna-449a在肺癌细胞株中的表达及其生物学功能研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师(或指导小组)的指导下，由本人独立完成。本学位论文研究所获得的研究成果，其知识产权归河北医科大学所有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学位论文主要内容相关的论文，第一署名为单位河北医科大学，试验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。否则，承担相应法律责任。研究生签名燃师签鼍≥够刑1二级学河北医科大学研究生学位论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特别加以标注和致谢等内容外，文中不包含其他人已

2、经发表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。研究生签名癯嬲翮麟砂)弓年3R15B目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯4研究论文miRNA．449a在肺癌细胞株中的表达及其生物学功能研究前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．1／日U舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯“材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯7结果

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．21附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．25讨{念⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯31结{仑⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯33参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．34综述microRNA．449a与肺癌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．37致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．49个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

4、⋯⋯⋯．50中文摘要miRNA．449a在肺癌细胞株中的表达及其生物学功能研究摘要目的：microRNA(miRNA、)是一类长度为20～23nt的在多种真核生物中可以调控基因表达的高度保守非编码小RNA【l，2】。miRNA可以通过与一个或多个mRNA的部分序列互补而调控基因表达进而影响生命活动，它的功能失调常常会引起重要过程出现紊乱，包括器官变化、细胞分化、细胞增殖、细胞存活等【3'4】。而在肿瘤的发生过程中，不同的miRNA可能起着癌基因或者抑癌基因的作用。目前，肺癌是发病率和病死率最高的恶性肿瘤之一，其病理类型主要为两种，一

5、是进展性较快的小细胞癌，占总体比例的13～15％左右，二是非小细胞癌，包括腺癌，鳞状细胞癌，大细胞癌，大细胞神经内分泌癌等，占总体比例的85％左右【5'6】。肺癌预后较差的原因有多方面，转移是影响肺癌患者疗效和生存时间的关键问题之一，明确的转移机制目前仍然不清楚，因此缺乏有效的治疗手段。目前研究发现，miRNA．449a在胃癌、膀胱癌、前列腺癌等癌症中均有抑癌作用，而miRNA一449a对于肺癌的生物学功能影响尚不清楚，在本研究中我们试图通过对miRNA．449a在肺癌中的生物学作用进行研究，探讨肺癌发生发展过程中的内在机制，为提高

6、肺癌的早期诊断、特异性治疗及预后判断水平提供新的思路，同时探索肺癌的特异性新靶标。方法：(1)基因芯片分析：分别提取高、低不同转移潜能人肺巨细胞癌细胞株95D／95C的总RNA，应用MicroRNA芯片技术检测95C／95D中miRNA一449a的差异性表达水平；(2)使用real．timePCR技术对差异表达的miRNA．449a进行验证：首先提取人肺巨细胞癌细胞株95C／95D的总RNA，然后设计miRNA．449a的反转录引物及上游引物和下游引物，设置内参U6为对照，反转录RNA检测miRNA．449a在95C／95D细胞株中

7、的表达水平，同时使用琼脂糖凝胶电泳对real．timePCR产物进行鉴定。(3)构建过表达miRNA一449a的真核表达载体pCDNA3．1一miR．449a：首先根据miRBase数据库确定miRNA．449a的序列，设计miRNA．449a的扩增引物进行扩增，扩增目的基因并进行鉴定后构建真核表达载体pCDNA3．1-miR-449a，通过酶切及基因测序再次鉴定。(4)建立过表达中文摘要miRNA．449a的稳定细胞株95D．pCDNA3．1-miR-449a-使用真核表达载体pCDNA3．1．miR-449a转染细胞株95D后应

8、用潮霉素进行筛选，筛选出可稳定过表达miR．449a的细胞株95D．pCDNA3．1-miR．449a并通过real．timePCR技术进行验证。(5)95D．pCDNA3．1．miR．449a细胞株增殖能力检测：设置空白对照组及阴性