microrna-183在非小细胞肺癌中的表达及生物学功能研究

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1、中图分类号：R89;R36;R39SICHUANMEDICALUNIVERSITY硕士学位论文_MicroRNA_183在非小细胞肺癌中的表达及生物学功能研究院（系）、所临床医学院研究生姓名邓_隱学科、专业肿瘤导师姓名吴敬波JL授二O—五年四月目录1MicroRNA-183在非小细胞肺癌中的表达及生物学功能研究…………………………………………………………………………11.1中文摘要………………………………………………………11.2英文摘要………………………………………………………41.3前言……………………………………………………………71.4材料与方法………………………………………

2、…………..141.5结果……………………………………………………………261.6讨论……………………………………………………………331.7结论……………………………………………………………381.8参考文献………………………………………………………391.9英汉缩略词对照表……………………………………………472致谢……………………………………………………………483微RNAs与肝癌关系的研究进展（综述）…………………………………………………………………49四川医科大学硕士学位论文MicroRNA-183在非小细胞肺癌中的表达及生物学功能研究摘要目的：在全世界范围内，肺癌是发病率

3、及死亡率均高的恶性肿瘤之一，是导致癌症致死的主要原因，其中非小细胞肺癌(non-smal1celllungcancer，NSCLC)约占肺癌的80%。研究表明，MicroRNA（miRNA)对肺癌的发生、发展发挥着极其重要的作用。在实验中首先对非小细胞肺癌组织标本与配对的癌旁正常组织标本利用实时荧光定量PCR(real-timePCR)技术检测MicroRNA-183（miRNA-183)的表达水平；其次构建miR-183稳定过表达细胞株和抑制miR-183表达细胞株，观察miR-183对非小细胞肺癌增殖、侵袭和迁移能力等生物学行为的影响,为肺癌的早期诊断，靶向治疗和改善预后提供了新

4、的理论依据。方法：1、通过qRT-PCR技术测定miR-183在21例非小细胞肺癌组织与癌旁正常组织中的差异表达。2、构建miR-183慢病毒及阴性对照载体,分别转染A549细胞株,建立稳定过表达miR-183的细胞株A549/miR-183mimics,抑制miR-183表达的稳定细胞株A549/miR-183inhibitor以及阴性对照组A549/negativecontrol,转染48h后在荧光显微镜下观察转染效率并利用qRT-PCR技术检测miR-183的表达水平，验证转染细胞株是否成功建立。3、A549/miR-183mimics，549/miR-183inhibitor

5、细胞株增值能力的观察：对转染后各组细胞株应用细胞增殖实验(CCK-8)来检测增值能力的变化情况。4、A549/miR-183mimics，A549/miR-183inhibitor细胞株迁移能力的观察：应用划痕实验对转染后各1组细胞株的迁移能力进行检测。5、A549/miR-183mimics，A549/miR-183inhibitor细胞株侵袭能力的观察：应用Transwell侵袭实验来检测转染后各组细胞株侵袭能力的变化情况。结果：1、相对于癌旁正常组织，miR-183在非小细胞肺癌组织中的表达水平呈显著上调(P<0.05），证明miR-183在NSCLC组织中明显升高；2、构建m

6、iR-183慢病毒载体,转染miR-183mimics48h后，qRT-PCR结果显示miR-183表达水平较对照组相比呈显著升高(18.23±0.68比1.0±0.29，P<0.01)，而转染miR-183inhibitor表达水平较对照组相比呈显著降低(0.06±0.01比1.0±0.29,P<0.01)，说明miR-183慢病毒过表达载体和抑制miR-183表达慢病毒载体构建成功，实验证明慢病毒转染有效；3、CCK-8实验表明,与空白对照组和阴性对照组相比，转染miR-183mimics的肺癌A549细胞株增殖速度明显增强，而转染miR-183inhibitor的肺癌A549细

7、胞株的增殖速度明显降低，证明过表达miR-183能增强A549细胞株增殖能力；4、划痕实验结果显示，miR-183mimics转染的A549细胞株迁移率明显大于对照组，证明miR-183mimics可增强A549细胞株的迁移能力；而miR-183inhibitor转染的A549细胞株迁移率明显小于对照组,证明miR-183inhibitor降低A549细胞株的迁移能力，证明过表达miR-183能增强A549细胞株迁移能力；5、Transwell侵袭实验中，