sept9基因在人肝癌细胞和组织中的表达差异及临床意义

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1、中图分类号：R735.7R365硕士学位论文SEPT9基因在人肝癌细胞和组织中的表达差异及临床意义院（系）、所基础医学院研究生姓名林春燕学科、专业病理学与病理生理学导师姓名税青林教授二Ο一三年四月1目录1SEPT9基因在人肝癌细胞和组织中的表达差异及临床意义…11.1中文摘要………………………………………………………31.2英文摘要………………………………………………………61.3前言……………………………………………………………91.4材料与方法……………………………………………………121.5结果……………………………………………………………231.6讨论…………

2、…………………………………………………291.7结论……………………………………………………………391.8参考文献………………………………………………………401.9英汉缩略词对照表……………………………………………452SEPT9与恶性肿瘤的研究（综述）…………………………462SEPT9基因在人肝癌细胞和组织中的表达差异及临床意义摘要目的：SEPT9是广泛存在于真核生物中的进化上保守的细胞骨架GTPase蛋白Septin基因家族成员之一，其结构特殊，且在多种肿瘤组织中存在表达差异，功能不尽相同，如SEPT9在乳腺癌中高表达，促进肿瘤增殖；在CRC中高甲基化，已经

3、作为筛选CRC的有效生物指标应用于临床。这引起学界的注意，是现阶段肿瘤相关研究的热点基因。但该基因在肝癌中的表达及在肝癌发生发展中的作用尚不清楚。鉴于此，本研究通过研究SEPT9基因在人正常肝细胞株L02、惰性转移潜能肝癌细胞株HepG2和人肝癌高转移细胞株MHCC97-H中的表达差异及其在正常肝组织和肝癌组织中的表达情况，探讨SEPT9在肝癌发生、发展中的作用及其与各临床病理参数之间的关系，为确立SEPT9成为预测肝癌侵袭转移的新的生物学指标以及基因治疗新靶点提供更充分的科学依据。方法：用半定量RT-PCR及Westernblot方法检测人正常肝细胞株L02、惰性转

4、移潜能肝癌细胞株HepG2、人肝癌高转移细胞株MHCC97-H三种不同转移潜能细胞中SEPT9mRNA及其蛋白的表达情况。收集泸州医学院附属医院病理科2010年3月至2012年12月间手术治疗的原发性肝癌患者的蜡块44例，同时收集病例的病历资料和临床资料，所有肝癌病例均经病理证实，正常肝组织蜡块7例，采用免疫组织化学法对正常肝组织及肝癌组织中SEPT9蛋白进行定性、定位分析并比较，结合阳性表达率及染色强度分析其与临床病理特征（如肿瘤的数目、大小、分化情况）之间的关系。结果：1、RT-PCR结果分析显示：SEPT9mRNA与内参基因GAPDH相对表达量在人正常肝细胞株L

5、02中为0.2628±0.0760，3人肝癌细胞株HepG2中为0.8963±0.8618，MHCC97-H中为2.1613±2.1613。SEPT9基因在HepG2中的表达比L02高2.41倍，差异有统计学意义（P=0.000<0.05）；SEPT9基因在MHCC97-H中的表达比L02高7.22倍，差异有统计学意义（P=0.002<0.05）；SEPT9基因在MHCC97-H中的表达比HepG2高1.41倍，差异有统计学意义（P=0.018<0.05）。2、Westernblot结果显示：Septin9蛋白与内参GAPDH蛋白的相对表达量在人正常肝细胞株L02中为

6、0.6200±0.0850，人肝癌细胞株HepG2中为1.0067±0.1106，MHCC97-H中为1.9300±0.2100。SEPT9蛋白在HepG2中的相对表达量比L02高0.62倍,两者差异有统计学意义（P=0.030<0.05）；MHCC97-H中该蛋白的表达比L02高2.11倍，差异有显著统计学意义（P=0.011<0.05）；SEPT9蛋白在MHCC97-H中的表达比HepG2高0.92倍，差异有显著统计学意义（P=0.019<0.05）。3、免疫组化结果显示：1）SEPT9蛋白的棕黄色颗粒主要出现在胞质，主要在肿瘤区域，同时正常肝细胞也有部分表达。S

7、EPT9蛋白在肝癌组织中表达阳性率70.45%（30/44），正常肝组织中表达阳性率14.29%（1/7）。SEPT9蛋白在人肝癌组织中的表达高于人正常肝组织，有2显著统计学意义（（χ=5.272，P=0.022）。2）肝癌组织中，SEPT9的表达水平与临床病理特征中肿瘤的转移存在显著相关，转移组SEPT9蛋白的表达2高于无转移组（χ=7.176，P=0.007）。与患者性别、年龄、肿瘤的大小、数目、肿瘤分化程度、组织学类型、有无肝硬化等病理特征无关。结论：1、SEPT9基因在肝癌细胞株中高表达，其表达量与肝癌细胞的转移潜能呈正相关。2、SEPT9蛋