fis1和mfn1表达及氧化应激在慢性氟中毒大鼠肾小管上皮细胞线粒体损伤中的作用

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1、《中国图书资料分类法》单位代码：10660分类号：R361学号：S100076贵阳医学院2013届硕士学位论文Fis1和Mfn1表达及氧化应激在慢性氟中毒大鼠肾小管上皮细胞线粒体损伤中的作用研究生：秦双立导师：官志忠教授年级：2010级专业：病理学与病理生理学2013年05月20日贵阳医学院2013届硕士研究生毕业论文目录摘要……………………………………2前言……………………………………4材料与方法………………………………6结果……………………………………14讨论……………………………………21结论……………………………………27参考文献…………………………………28

2、英文摘要…………………………………31致谢……………………………………33缩略词表…………………………………34论文原创性声明…………………………35附：综述………………………………361贵阳医学院2013届硕士研究生毕业论文Fis1和Mfn1表达及氧化应激在慢性氟中毒大鼠肾小管上皮细胞线粒体损伤中的作用专业：病理学与病理生理学研究生：秦双立导师：官志忠教授【摘要】目的研究线粒体分裂蛋白1（Mitochondrialfissionprotein1，Fis1）和线粒体融合蛋白1（Mitochondrialfusinprotein1，Mfn1）表达及氧化应激在慢性氟中毒大

3、鼠肾小管上皮细胞线粒体损伤中的作用，探讨慢性氟中毒肾脏细胞线粒体损伤发病机制，为地方性氟中毒的防治提供理论依据。方法60只SD(SpragueDawley)大鼠随机分为3组，每组20只，组内雌雄各半；对照组饮用自来水（含氟量低于0.5mg/L），低氟组、高氟组分别饮用加氟10mg/L、50mg/L的自来水。分别于3、6个月末经股动脉放血处死大鼠后取肾脏组织；采用氟离子选择电极法检测大鼠尿氟；采用实时荧光定量PCR法和免疫组织化学法检测肾脏组织Fis1和Mfn1表达；采用硫代巴比妥酸法测定丙二醛（Malondialdehyde，MDA），比色法测定总抗氧化能力（Tota

4、lantioxidantcapacity，T-AOC）；光镜观察肾脏组织学结构，透射电镜观察肾小管上皮细胞线粒体超微结构；实验结果作统计学分析。结果（1）染氟组大鼠出现不同程度的氟斑牙，高氟组重于低氟组。（2）染氟组大鼠尿氟含量高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。（3）染氟组大鼠肾脏组织Fis1在转录水平和蛋白水平表达高于对照组，而Mfn1在转录水平和蛋白水平表达低于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。（4）染氟组大鼠肾脏组织MDA水平高于对照组，而T-AOC水平低于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。（5）光镜下可见染氟组大鼠肾小管上皮细胞胞浆

5、疏松淡染。（6）透射电镜下可见染氟组大鼠肾小管上皮细胞线粒体嵴模糊或者消失和线粒体肿胀，线粒体分裂截面出现。结论摄入过量的氟引起染氟组大鼠肾脏组织Fisl在转录水平和蛋白水平表达升高，Mfn1在转录水平和蛋白水平表达降低，促进线粒体分裂并抑制线2贵阳医学院2013届硕士研究生毕业论文粒体融合，导致融合分裂失衡和线粒体超微结构改变。Fis1和Mfn1表达与氧化应激之间存在相互影响的可能，该过程在慢性氟中毒大鼠肾小管上皮细胞线粒体损伤的发生机制中可能起重要作用。关键词：氟中毒；线粒体分裂蛋白1；线粒体融合蛋白1；氧化应激3贵阳医学院2013届硕士研究生毕业论文前言氟（fl

6、uorine）属于卤素的负一价非金属元素，化学符号为F、原子序数是9。氟是化学性质最活泼、氧化性最强的物质，可在化合物中置换其它非金属元素，可同所有的非金属和金属元素猛烈反应，生成氟化物。氟可参与体内多种化学反应及代谢过程，对机体代谢有一定的作用。但是，如果长期摄入大量氟，可[1]导致氟在体内蓄积，发生慢性氟中毒。在特定的自然环境中，人体长期通过饮水、空气、食物、茶等介质摄入过量氟所导致的全身性慢性中毒病变，称为地方性氟中毒（endemicfluorosis），简称地氟病。地氟病最早发现的病理改变主要在患者的骨骼和牙齿，表现为氟骨症（skeletalfluorosis

7、）和氟斑牙（dentalfluorosis）；目前认为该病也同时[2]引起机体多个系统和器官的广泛性病理改变。氟化物在组织器官的蓄积是造成损伤作用的物质基础，肾脏是排除氟的主要[3]器官，因而也是氟中毒的靶器官。线粒体是细胞供能代谢中心，是众多环境化学外源物毒害作用的优先靶标，氟中毒可以引起广泛的全身性病变，对线粒体的[4]损伤尤为明显。线粒体损伤包括形态结构的破坏，线粒体DNA突变，三磷酸腺苷合成受限，钙稳态失衡，氧化应激产物积聚及代谢功能障碍等，严重时可引起[5]细胞损伤和死亡。正常的线粒体都处于融合和分裂的动态平衡当中以应对细胞动态能量需求变化