marveld1与核仁素相互作用及其与dna损伤关系的研究

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1、硕士学位论文MARVELD1与核仁素相互作用及其与DNA损伤关系的研究RESEARCHONTHEINTERACTIONBETWEENMARVELD1ANDNUCLEOLIN&THEIRIMPACTINDNADAMAGE彭林辉哈尔滨工业大学2015年6月国内图书分类号：Q71学校代码：10213国际图书分类号：577.21密级：公开理学硕士学位论文MARVELD1与核仁素相互作用及其与DNA损伤关系的研究硕士研究生：彭林辉导师：李钰教授申请学位：理学硕士学科：生物学所在单位：生命科学与技术学院答辩日期：2015年6月授予

2、学位单位：哈尔滨工业大学ClassifiedIndex:Q71U.D.C:577.21DissertationfortheMasterDegreeinScienceRESEARCHONTHEINTERACTIONBETWEENMARVELD1ANDNUCLEOLIN&THEIRIMPACTINDNADAMAGECandidate：PengLinhuiSupervisor：Prof.LiYuAcademicDegreeAppliedfor：MasterofScienceSpeciality：BiologyAffiliat

3、ion：SchoolofLifeScience&TechnologyDateofDefence：June,2015Degree-Conferring-Institution：HarbinInstituteofTechnology哈尔滨工业大学理学硕士学位论文摘要癌症的发生与癌基因、抑癌基因以及其他相关基因具有十分密切的关系。MARVELD1基因是本实验室在前期研究中发现的一个新的抑癌基因。MARVELD1（MARVELdomaincontaining1）基因因含MARVEL(MALandrelatedproteinsf

4、orvesicletraffickingandmembranelink)结构域，故定名为MARVELD1。研究结果表明，MARVELD1具有抑制肿瘤增殖并导致细胞周期阻滞等作用，与多种基因和蛋白具有相互作用。前期研究结果显示，MARVELD1蛋白可能与核蛋白核仁素（Nucleolin，C23）具有相互作用。MARVELD1与核仁素均为定位于细胞核的蛋白，并且都参与了DNA损伤修复。本文以诱导DNA损伤为切入点，选用多种实验方法从不同角度研究分析了MARVELD1与核仁素的相互作用情况及二者的关系。首先，本文采用人宫颈癌

5、细胞系HeLa细胞完成了MARVELD1与核仁素的共定位分析，进而，研究利用免疫共沉淀（Co-IP）技术和GSTpull-down技术确认了MARVELD1与核仁素的相互作用，并通过重组体技术构建核仁素的重组截短体，明确了二者的结合结构域。随后，本文采用WesternBlotting技术探讨MARVELD1与核仁素在诱导DNA损伤后的表达变化。最后，本文还通过亚细胞成分分离技术及siRNA干扰技术，研究了MARVELD1对核仁素亚细胞定位的影响。结果表明，MARVELD1与核仁素在DNA损伤以后共定位非常明显，二者确实

6、具有相互作用，并且此相互作用在DNA损伤修复过程中有一个动态变化过程。MARVELD1与核仁素在DNA损伤修复过程中的表达趋势不一致，核仁素表达增高时MARVELD1已经开始表达下降。干扰MARVELD1结果表明，MARVELD1对核仁素亚细胞定位有一定影响。综上所述，本文确认了MARVELD1与核仁素的相互作用情况并明确了二者的结合结构域，研究显示了二者对DNA损伤都有明显响应，说明MARVELD1与核仁素在DNA损伤修复过程中具有一定作用，且二者有一定相互作用关系，这种关系可能是通过MARVELD1影响核仁素的亚细

7、胞定位来实现的。关键词：MARVELD1；核仁素；DNA损伤修复；蛋白质相互作用；亚细胞定位I哈尔滨工业大学理学硕士学位论文AbstractOncogene,tumor-suppressorgeneandotherrelatedgeneshaveaveryimportantroleinthecanceroccurrenceanddevelopment.TheMARVELD1isanovelfunctionalgenewhichisfoundbyourlaboratorywhenexploreingcarcinogene

8、sis.ItissocalledMARVELD1becausethatithastheMARVEL(MALandrelatedproteinsforvesicletraffickingandmembranelink)domain.OurreseachhasshownthatMARVELD1isatumor-suppressorge