抗mbl单抗1c8对人单核巨噬细胞调理吞噬功能的影响及其机制

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1、南方医科大学2009级硕士学位论文抗MBL单抗1C8对人单核巨噬细胞调理吞噬功能的影响及其机制Theeffectsandmechanism!ofantiMBLmAb1C8eellectsamecanlsmsanti-MilLmAonnopsonophagocytosisofmonocytes／macrophagesinvitro课题来源：国家自然科学基金项目(30972679)学位申请人张毅导师姓名陈政良教授专业名称免疫学培养类型学术型培养层次硕士研究生所在学院基础医学院答辩委员会主席金伯泉教授第四军医大学答辩委员会成员龚非力教授华中科技大学吴长有教授中山大学郑利民教授中山大学涂文伟教

2、授香港大学向军俭教授暨南大学富宁教授南方医科大学论文评阅人马骊教授南方医科大学邢飞跃教授暨南大学2013年4月26日广州JIMIIIIIIIIMIIII／IIIIIIlllIIIIY2406038硕士学位论文抗MBL单抗1C8对人单核巨噬细胞调理吞噬功能的影响及其机制硕士研究生：张毅指导教师：陈政良教授摘要甘露聚糖结合凝集素(marman．bindinglectin，MBL)作为人体天然免疫系统中重要的模式识别受体，近年来一直是天然免疫研究的热点之一。MBL是由肝细胞分泌的胶原样复合血浆蛋白，为C型凝集素家族成员【l】。成熟的MBL肽链自N端至C端依次为富含半胱氨酸(Cys)的N末端区

3、、胶原样区(collagen．1ikeregion，CLR)、Ot螺旋构成的颈区和C端的糖识别域(carbohydraterecognitiondomain，CRD)【21。MBL在机体天然免疫中有重要的抗感染作用，它利用CRD识别广泛分布于多种病原体如细菌、真菌、病毒和寄生虫等表面的糖蛋白或糖结构，例如D．甘露聚糖、盐藻糖、N．乙酰甘露糖胺和N．乙酰葡萄糖胺等。其CLR与甘露聚糖相关丝氨酸蛋白酶(mannan．bindinglectinassociatedserineprotease，MASPl、MASP2、MASP3)结合形成MBL．MASPs复合物，激活补体介导的凝集素途径而发挥

4、调理功能；或者与吞噬细胞胶凝素受体(ClqR)结合，以不依赖于补体的方式启动调理吞噬【1】。此外，球形结构的CRD与某些病毒(如流感病毒A)结合后可直接中和病毒活性‘3'4】。血浆中的MBL是二至六聚体的混合物【5，61，只有三聚体及以上的高聚体MBL才能有效识别病原体表面的糖结构，进而激活补体【7】。MBL在人血清中的含量很低，正常人平均含量为lmg／L。MBL亦是一种T中文摘要急性期反应蛋白，在应激状态下(如外科手术、病原体感染、肿瘤等)，其血浆浓度可升高2～3倍。MBL缺损患者处于高度的感染风险之中，表现为多种病原体的反复急慢性感染，然而MBL水平过高，可能会通过凝集素途径而过度

5、活化补体，导致机体的炎症性损伤[I,8,91。有文献报道，高MBL水平与缺血．再灌注损伤的炎症反应、糖尿病肾脏并发症及原发性胆汁性淤积型肝硬化有关【10,11,12】。相反，MBL水平低下，其激活补体的能力相对下降，则降低了炎症介质对宿主细胞的损伤。此外，高水平MBL可能会促进吞噬细胞(如单核巨噬细胞、中性粒细胞等)对胞内寄生菌的摄取，如结核分枝杆菌和利什曼原虫等，增加了病原体入侵的机会ll31，因此正常水平的MBL对机体尤为重要。众所周知，单核巨噬细胞在天然免疫应答中发挥重要作用，并参与特异性免疫应答。正常情况下单核巨噬细胞通过吞噬异物、细菌、衰老和突变的细胞以及天然的免疫复合物维持

6、机体的免疫稳态【l41。据文献报道，富含MBL的人血清能促进吞噬细胞的调理吞噬功能【15,16J。鉴于上述MBL的重要作用和商品化抗MBL抗体的昂贵价格，本科室制备了一系列抗MBL单克隆抗体，并从中筛选了一株功能性单抗1C8。有研究表明，MBL能增强补体的活化和促进吞噬细胞吞噬病原体，但是抗MBL单抗对单核巨噬细胞调理吞噬的作用目前尚未见报道，故本课题组以单核巨噬细胞为切入点，初步探索1C8对单核巨噬细胞调理吞噬功能的影响及其作用机制。我们首先鉴定了抗MBL抗体1C8的纯度和生物学活性，它能与本科室提取的天然有活性的MBL和商品MBL以剂量依赖的形式结合，并初步探讨了1C8对混合人血清

7、刺激的单核巨噬细胞调理吞噬功能的影响及其作用机制。第一章抗MBL单克隆抗体1C8的纯化和鉴定随着对MBL研究的不断深入，发现其除了能识别并清除病原体之外，还有许多内源性功能(endogenousfunction)，例如识别缺血-再灌注损伤中暴露的自身抗原、参与吞噬凋亡细胞、结合肿瘤细胞并发挥MBL介导的细胞毒作用等，硕士学位论文但是抗MBL抗体有关的报道甚少。目前市场上已经有商品的抗MBL单克隆抗体，但是因为其价格昂贵，令人望而却步，而且其针对