促性腺激素在雌性半滑舌鳎繁殖周期的生理功能研究

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2、素在雌性半滑舌鳎繁殖周期的生理功能研究学位论文答辩日期：指导教师签字：答辩委员会成员签字：独创声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含未获得（注：如没有其他需要特别声明的，本栏可空）或其他教育机构的学位或证书使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：签字日期：年月日----------------------------------------------------------------

3、-----学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，并同意以下事项：1、学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。2、学校可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同时授权清华大学“中国学术期刊(光盘版)电子杂志社”用于出版和编入CNKI《中国知识资源总库》，授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》。（保密的学位论文在解密后适用本授权书）学位论文作者签名：导师签字：签字日期：年月日签字日期：年月日促性腺激素在雌性半滑舌鳎繁殖周

4、期的生理功能研究促性腺激素在雌性半滑舌鳎繁殖周期的生理功能研究摘要本文以人工养殖半滑舌鳎（CynoglossussemilaevisGünther）为研究对象，运用组织学、内分泌学方法、激素放射免疫测定方法以及分子生物学方法，对半滑舌鳎卵巢发育、促性腺激素（GonadotropinHormone,GtH）水平周期变化及其基因的克隆、表达水平等进行了系统的分析与研究，以期进一步阐明GtH的生理功能，为改善工厂化养殖鱼类的生殖调控提供有价值的参考信息。主要研究内容与结果如下：1.半滑舌鳎促性腺激素α亚基（CGα）基因的克隆及其时空表达分析采用RACE方法，从半滑舌鳎脑垂体中克隆了CGα全长cDNA

5、。半滑舌鳎CGα基因全长为685bp，其开放阅读框为384bp，编码了含127个氨基酸的蛋白，N端33个氨基酸为信号肽。半滑舌鳎CGα成熟肽与其它脊椎动物CGα成熟肽结构特征相似，具有10个半胱氨酸残基和2个N-糖基化位点。CGα成熟肽序列分析表明，半滑舌鳎CGα与鲽形目和鲈形目鱼类CGα同源性最高为60-70%。实时荧光定量PCR结果表明，半滑舌鳎CGαmRNA在被检测的12个组织中均有表达，在垂体组织中大量表达，其次是鳃、肾脏、肌肉、卵巢和脑组织，在心脏、头肾、肝和脾等组织中只微量表达；对繁殖周期CGα表达水平进行测定有助于理解鱼类的分子调控机理。RT-PCR结果表明，繁殖周期雌性半滑舌鳎

6、CGαmRNA在Ⅳ、Ⅴ期表达量最丰富。2.半滑舌鳎促滤泡激素（FSH）基因全长cDNA克隆、时空表达利用RT-PCR和RACE技术首次克隆得到半滑舌鳎FSH基因全长cDNA序列。全长为541bp，开放阅读框为393bp，编码130个氨基酸。发现一个N-糖基化位点：24-27NTT。与其它脊椎动物的FSH成熟肽氨基酸序列同源性比较表明：半滑舌鳎FSH与鲽形目和鲈形目鱼类FSH同源性最高为42-49%。实时荧光定量PCR组织表达分析表明，FSHmRNA除在垂体中大量表达外，其他组织也有表达，尤以脑、性腺表达量较高。半滑舌鳎FSHmRNA在垂体以外组织中的广泛表达，暗示FSH可能具有广泛的生理功能。

7、RT-PCR方法对繁殖周期雌性半滑舌鳎FSH基因表达水平进行测定，结果表明，FSHmRNA在Ⅳ期表达I促性腺激素在雌性半滑舌鳎繁殖周期的生理功能研究量最丰富。3.半滑舌鳎促黄体激素（LH）基因全长cDNA克隆、时空表达利用RACE技术首次克隆了半滑舌鳎脑垂体中LH基因cDNA全长序列。该基因全长670bp，开放阅读框为477bp，编码158个氨基酸。与其它脊椎动物的LH成熟肽氨基酸序列同源性比较表