脂联素(adipoq)及其受体(adipor12)对山羊脂肪沉积的作用机制研究

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1、万方数据SichuanAgriculturalUniversityMasterDegreeDissertationStudyonthemechanismoffatdepositionactionofAdipoQandAdipoRl／2ingoatXueKeDirectedbyProf．ZhangHong—pingAssociateResearchFellowWangLin-jieAnimalGeneticsandBreedingMolecularGeneticsandGoatBreedingYa’an，Sichuan，ChinaJune，2014万方

2、数据论文指导小组成员憋李利(教授)仲涛(副研究员)本论文由高等学校博士点基金资助项目(20115103120011)、四川省科技支撑计划(2011NZ0099．36)和国家星火计划重点项目(2012GA810001)资助在四川农业大学“畜禽遗传资源发掘与创新利用四川省重点实验室”完成万方数据论文独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行研究工作所取得的成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，学位论文中不包含其他个人或集体己经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得四川农业大学或其它教育机构的学位或证书所使用过的材料。与

3、我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名．聋对知心年g月／』日关于论文使用授权的声明本人完全了解四川农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意四川农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。囱本论文不保密。口本论文保密，在一年解密后适用本授权。(请在以上口内划“√”)研究生签名：导师签名：知

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7、{?矿万方数据摘要本试验目的是研究AdipoQ、AdipoRl和AdipoR2对山羊脂肪沉积的作用机制，为后续通过AdipoQ来调控山羊肌肉中的脂肪酸合成，改善山羊肉品质提供依据。试验克隆得到南江黄羊AdipoQ、AdipoRl和AdipoR2基因的全长编码区序列。利用半定量RT-PCR检测3个基因在山羊11个组织(皮下脂肪、背最长肌、股二头肌、腓肠肌、卵巢、子宫、脑、瘤胃、肾脏、肝脏和心脏)中的表达模式。利用qPCR检测AdipoQ、AdipoRl和AdipoR2基因在南江黄羊出生后5个发育阶段(3d、30d、60d、90d和120d

8、)背最长肌中mRNA的相对表达量。利用含高浓度葡萄糖的培养基(25raM／L)诱导山羊骨骼肌卫星细胞(Skeletalmusclesatellitecells，SMSCs)向脂肪细胞分化，油红0染色检测细胞内脂肪滴的沉积，qPCR检测AdipoQ、AdipoRl、AdipoR2、脂肪酸合成及成脂分化相关基因的相对表达量。构建AdipoQ基因过表达载体pEGFP—N1一AD，并在山羊SMSCs中过表达AdipoQ基因。荧光显微镜检测融合蛋白的亚细胞定位，qPCR检测AdipoRl、AdipoR2、脂肪酸合成及成脂分化相关基因的相对表达量。结果如下：(1

9、)克隆得到南江黄羊AdipoQ、AdipoRl和AdipoR2基因的CDS区全序列(GenBank登录号分别为JX573539、KC286912和JX573540)。CDS区全长分别为720bp、1128bp和1176bp，编码氨基酸数分别为239、375和391。南江黄羊与人、牛和猪AdipoQ基因核苷酸序列的一致性达到85％、97％和88％；Aaipom基因核苷酸序列一致性为87％、97％和90％；AdipoR2基因核苷酸序列一致性为86％、97％矛n88％，表明3个基因在物种间高度保守。(2)半定量RT-PCR检测到AdipoO基因mRNA在脂

10、肪组织中表达量最高，在肌肉组织和肝脏中表达量相对较低，其它组织中无表达。AdipoRl基因mRNA在所有组织中都有表达，在肌肉组织、瘤胃、脂肪组织中表达量较高，其它组织中表达量较低。AdipoR2基因mRNA同样在所有组织中都有表达，在脂肪组织、肌肉组织中表达量相对较高，在其它组织中表达量较低。3个基因主要在脂肪组织和肌肉组织中表达，表明3个基因在这些组织中起到重要作用。(3)利用qPCR检测南江黄羊背最长肌(3d、30d、60d、90d和120d)AdipoQ、AdipoRl和AdipoR2基因mRNA的相对表达量，发现在南江黄羊公、母羊背最长肌中

11、AdipoQ的表达相似，呈上升-下降一上升趋势，公羊中3d时表达量最低(P<0．05)，万方数据120d时表