程序化设计简并引物与克隆小菜蛾酯酶基因

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2、kyl技术与方法3程序化设计简并引物与克隆小菜蛾酯酶基因33黄菁王少丽乔传令k中国科学院动物研究所o农业虫鼠害综合治理研究国家重点实验室北京tsss{slΑυτοµατεδπρογραµµινγοφδεγενερατεπριµερσανδτηεχλονινγοφτηεδιαµονδβαχκεστερασεγενεq33¬±ªo•≥«¤²2¬o±≤«∏¤±2¬±ªkΙνστιτυτεοφΖοολογψoΧηινεσεΑχαδεµψοφΣχιενχεσoτηεΣτατεΚεψΛαβο2ρατορψοφΙντ

3、εγρατεδΜαναγεµεντοφΠεστΙνσεχτσανδΡοδεντσo¨¬¬±ªtsss{so≤«¬±¤lqΑβστραχτ·¬¶¤±²µ°¤¯¶·µ¤·¨ª¼·²¦¯²±¨³µ²·¨¬±©¤°¬¯¼¦∏¶¬±ª·«¨§¨ª¨±¨µ¤¦¼²©·«¨¦²§¨·²§¨¶¬ª±°≤³µ¬°2¨µ¶©µ²°³µ²·¨¬±°∏¯·¬³¯¨2¶¨´∏¨±¦¨¤¯¬ª±°¨±·¶q•¬·«·«¨·²²¯¶²©¥¯¤¶·³o¥¯²¦®°¤®¨µo≤²§¨²³o≥º¬¶¶°µ²·o¤±§≥³×µ∞o§¨ª¨±¨µ¤·¨³µ¬°¨µ¶º¨µ¨§¨¶¬ª

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5、·²²¥·¤¬±¬±ª¶³¨¦¬©¬¦×2°≤³µ²§∏¦·qΚεψωορδ󧨪¨±¨µ¤·¨³µ¬°¨µ§¨¶¬ª±o≤²§¨²³¬±¶¨¦·¨¶·¨µ¤¶¨ª¨±¨o×2°≤摘要利用遗传密码简并性o针对特定的氨基酸序列设计简并引物o是克隆蛋白质家族¦的常规方法∀文章介绍了利用¥¯¤¶·³o¥¯²¦®°¤®¨µo≤²§¨²³o≥º¬¶¶°µ²·o≥³×µ∞等网络工具及数据库设计昆虫抗性酯酶的简并引物∀用这对引物从抗有机磷杀虫剂的小菜蛾Πλυτελλαξψλοστελλα中克隆了t段¦∀经¥¯¤¶·¬检索ª¨±¨¥¤±®o发现此¦产物与其它

6、昆虫抗性酯酶基因有高度的相似性∀研究表明o程序化设计的简并引物可信性强o阳性率高o能迅速得到满意结果∀关键词简并引物设计o≤²§¨²³o昆虫酯酶基因o×2°≤酯酶基因扩增是昆虫抗药性形成的主要机昆虫酯酶序列∀经多序列比对软件¥¯²¦®°¤®¨µ理∀但目前与抗性相关酯酶基因的克隆还仅限分析o得出它们无间隙的氨基酸序列保守区≈t 于蚊虫!蚜虫!果蝇等少数模式昆虫∀小菜蛾k¯²¦®¶l∀最后用≤²§¨²³k≤±¶¨±¶∏¶2∞ª¨±¨µ2Πλυτελλαξψλοστελλα是世界性的害虫o主要危害十¤·¨¼¥µ¬§¯¬ª²±∏¦¯¨²·¬§¨°µ¬°

7、¨µ¶l针对这些保守字花科蔬菜∀近年研究表明o小菜蛾的抗药性区设计出多条简并引物∀以其中t对引物对小≈u 菜蛾¦进行扩增o得到t条单一的条形成也与酯酶活性的增加密切相关∀但从ª¨±¨¥¤±®中o尚无小菜蛾酯酶基因被克隆的报带∀°≤产物经克隆测序o并经¥¯¤¶·¬检索道∀已发表的应用于克隆昆虫抗性相关酯酶基ª¨±¨¥¤±®o证明此段¦为酯酶家族新基因∀因的简并引物o因简并性高o×2°≤产物假阳1材料和方法性多o限制了对小菜蛾抗性分子机理的深入研究∀因此针对昆虫酯酶序列设计一对高度特异111材料性的简并引物进行昆虫抗性相关基因的克隆变11111主要

8、软件¥¯¤¶·³k≤o≥l~¥¯²¦®2得尤为重要∀3中国科学院知识创新项目k≥≤÷u2st2sul资助∀本文介绍的方法是先从≥º¬¶¶°µ²·n33通讯作者o∞2°¤¬¯}´¬¤²¦¯³¤±§¤q¬²½q¤¦q¦±≥³×µ∞蛋白数据库中检索出w条抗性相关收稿日期}usst2tt2vso修回日期}ussu2sx2u{oussu2sz2tt再修回ussuv

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10、#°¤®¨µkƒµ¨§∏·¦«¬±¶²±≤¤±¦¨µ¨¶¨¤µ¦«≤¨±·¨µot°¬±ozuεt°¬±o共进行vx次循环o最后在≥l~≤²§¨²³kƒµ¨§

11、∏·¦«¬±¶²±≤¤±¦¨µ¨¶¨¤µ¦«zuε延伸ts°¬±∀≤¨±·¨µo≥l~¥¯¤¶·¬k≤o≥l蛋白质数据库11112昆虫材料抗性小菜蛾Π