牛蒡子葡萄糖苷酶生物转化及其性质研究

《牛蒡子葡萄糖苷酶生物转化及其性质研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、分类号学号M201171584学校代码10487密级硕士学位论文牛蒡子葡萄糖苷酶生物转化及其性质研究学位申请人：黄钢学科专业：生物化工指导教师：余洪波副教授答辩日期：2014年1月16日万方数据AThesisSubmittedinPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofPhilosophyStudyonbiotransformationandcharacterizationofglycosideshydrolasefromarctiumCandidate:Hua

2、ngGangMajor:BiochemicalEngineeringSupervisor:YuHongboHuazhongUniversityofScience&TechnologyWuhan430074，P.R.ChinaJanuary,2014万方数据独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除文中已经标明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到，本声明的法律结果由本人承担

3、。学位论文作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权华中科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□，在_____年解密后适用本授权书。本论文属于不保密□。（请在以上方框内打“√”）学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日万方数据华中科技大学硕士毕业论文摘要牛蒡子中主要物质为牛蒡苷，而作为

4、主要药理活性物质的牛蒡苷元含量非常低，因此将牛蒡苷转化为牛蒡苷元具有重要的应用价值。本研究利用源于牛蒡子的葡萄糖苷酶将牛蒡苷生物转化为牛蒡苷元，并对牛蒡子葡萄糖苷酶的分离纯化、酶学性质及其对槐角苷的生物转化进行研究，主要研究结果如下：利用牛蒡子所含的葡萄糖苷酶对牛蒡苷进行生物转化。首先建立牛蒡苷元HPLC测定方法：流动相甲醇-水（1：1.1）；流速1.0mL/min；测定波长280nm；进样量10μL，在该测定方法下，牛蒡苷元测定的稳定性、精密度和回收率分别为0.91%、0.52%和101.2%；其次，获得了牛蒡苷元最优提取条件：乙醇

5、浓度50%、料液比1：10、提取时间16min，在该条件下，牛蒡苷元提取率达到9mg/g，较优化前提高28.59%；最后确定牛蒡子葡萄糖苷酶生物转化牛蒡苷的最优时间为3min，转化率达到90%以上，牛蒡苷元含量从7.10mg/g上升到41.53mg/g，进一步通过萃取、硅胶柱层析、乙醇结晶获得牛蒡苷元晶体，其纯度达到98.50%，并对分离纯化的牛蒡苷元进行了UV、IR、MS、NMR结构鉴定，证实分离纯化产物为牛蒡苷元。利用离子交换层析、疏水作用层析等方法从牛蒡子中分离纯化得到电泳纯的牛蒡子葡萄糖苷酶，收率为2.61%，纯化倍数达到13

6、2倍，比酶活达到3.58U/mg。进2+一步研究发现，纯化牛蒡子葡萄糖苷酶的最适温度和pH值分别为55℃和6.0；Cu、2+3+Cd、Al和SDS对该酶酶活强烈抑制。最后，研究了纯化牛蒡子葡萄糖苷酶对其它糖苷类物质的转化能力。发现该糖苷酶可将槐角提取液中的染料木素鼠李糖基葡糖二苷水解成槐角苷，进而转化为染料木素。转化32min后，槐角提取液中染料木素的生成量达到527.7mg/L，是商业纤维素酶转化效果的2倍，初步说明牛蒡子葡萄糖苷酶是一种广谱性的高效糖苷酶。通过上述研究，本论文成功建立了一种利用牛蒡子葡萄糖苷酶制备高纯度牛蒡苷元的方

7、法，同时也为牛蒡子葡萄糖苷酶在其它中药生物转化中奠定了应用基础。关键词：牛蒡子，生物转化，牛蒡苷，糖苷酶，分离纯化，槐角苷I万方数据华中科技大学硕士毕业论文AbstractArctiinisthemajorcomponentinarctium,whilearctigeninproducedfromArctiinwasthemainsourceofpharmacologicalactivitywhosecontentisverylow.Sotheconversionfromarctiintoarctigeninisofgreatpote

8、ntialinapplication.Thetransformationofarctiintoarctigeninbyglycosidehydrolaseinarctiumisinvestigated,aswellast