海豚链球菌（streptococcus iniae）全细胞灭活疫苗对罗非鱼（oreochromis niloticus）的免疫保护性研究

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1、中山大学硕士学位论文海豚链球菌（Streptococcusiniae）全细胞灭活疫苗对罗非鱼（Oreochromisniloticus）的免疫保护性研究姓名：王凡申请学位级别：硕士专业：水生生物学指导教师：李安兴20070602海豚链球菌(Streptococcusiniae)全细胞灭活疫苗对罗非鱼(Oreochromisni劂cus)的免疫保护性研究王凡专业：水生生物学指导老师：李安兴教授摘要对于目前频繁爆发的细菌性疾病，药物治疗有很多弊端，相比而言疫苗接种对养殖环境和人类健康是安全的，因此被认为是防治细菌性疾病的最重要方法之一。本研究针对华南地区淡、海水养殖鱼类频繁发生的海豚链球

2、菌病，以其主要病原海豚链球菌的疫苗为研究对象，主要进行了海豚链球菌的灭活条件研究、疫苗用菌株的筛选、疫苗用抗原浓度的筛选、罗非鱼对不同佐剂海豚链球菌灭活苗的免疫应答的研究，为海豚链球菌疫苗的推广和应用奠定基础。为建立海豚链球菌疫苗的工厂化生产工艺，研究了疫苗的福尔马林灭活条件，从时间和疫苗的安全性角度来讲，28℃下，0．3～O

3、5％的福尔马林浓度灭活菌液是较合适的。这些参数为海豚链球菌灭活苗的大规模生产提供重要理论依据。。对疫苗的免疫保护性的评价主要从疫苗诱导的特异性抗体效价水平(包括用微量凝集反应、ELISA法)以及鱼体对人工攻毒的相对保护率(relativepercentsurv

4、ival，RPS)两方面进行评价。结果表明，抗体效价值与累积死亡率呈显著的负相关(p

5、可分别用于淡、海水鱼类免疫实验；本研究之后试验均以TBY-1为试验菌株(HD．I株在海水鱼中的试验由实验室同事完成)。为制备效果较佳的海豚链球菌疫苗，比较了三种不添加佐剂的海豚链球菌灭活苗(抗原浓度为1010、i09、iosCFUXmld)对罗非鱼进行一次免疫后攻毒与两次免疫后攻毒所产生的免疫保护效果。结果表明，免疫一次的三组之间的免疫效果无显著性差异，能显著高于对照组，但显著低于免疫两次的三组(p

6、强剂)四种佐剂苗对罗非鱼的免疫效果进行比较，结果表明，佐剂组免疫效果显著优于不添加佐剂的六组。其中佛氏佐剂与白油佐剂免疫效果显著优于其它佐剂组，但佛氏佐剂价格昂贵、有较大副作用，因此认为白油佐剂(EusA测定该免疫组最高抗体效价为I：2263，RPS为100．O％)是最可行的海豚链球菌疫苗佐剂之一。为减少生产时间与开销，本研究还比较了1010、i09、i08CFUXml。1三个抗原浓度白油佐剂苗对罗非鱼的免疫效果。i09白油组抗体效价(1：1131)低于10m白油组(1：2263)，显著高于ios白油组(1：400)(口<0．05)；109白油组死亡率稍高于10加自油组，但无显著性差

7、异，而显著高于ios白油组，相对保护率达到92．O％。因此，作者认为i09自油佐剂苗在生产中是最实用，而且又能达到免疫目的的海豚链球菌疫苗之一．关键词：海豚链球菌，疫苗，罗非鱼，抗体效价，免疫保护性nProtectiveimmuneefficacyofinactivatedwholecellvaccineofStreptococcusiniaeonTilapia(Oreochromisniloticus)FanWangSupervisor：ProfAn—XingLiMajor：HydrobiologyAbstractBactefiosisisaseriousproblemforthe

8、fishfarmingindustry,whileveterinarymedcinehasbeenfoundmoreandmoredrawbackstheseyears，sovaccinationwasregardedasallidealstrategy．Atpresenttime,streptococosishasbrokenoutfrequentlyinmarineand缸shwaterfishes，andStreptococcusiniaewason