大鼠脑损伤后认知障碍的实验研究

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1、变化。通过两方面变化趋势，综合分析两种因子在脑损伤后认知功能障碍中的可能作用。7实验材料与方法动物实验严格遵守《医学实验动物管理实施细则》及其它有关法律、法规执行。一．大鼠脑损伤模型的建立和检测1．实验材料：自制自由落体打击装置；普通级健康雄性SD大鼠，体重(230土30)g(福建医科大学实验动物中心购得)；HE自动染色机(ShandonVarislain英国)．实验参照FEENEY’S法改进并设计打击装置，其装置由底座、撞杆、下落砝码和外周导管组成。外周导管为不同长度的铜管，内径16ram，自上而下每间隔1cm带有一个直径5mm侧孔，铜管下端焊接一环形铜片封口，中心留有

2、5mm小孔。铁制砝码为20g，直径15ram，上下端均为平面，铁制撞杆由两个圆柱体连接而成，其纵剖面为“T”形。上份高5mm，直径15ram，位于导管内；下份高3．5mm，直径4．5mm，正好从导管底部的孔中穿出作为打击面¨1(图1)。图1．自由落体打击装置示意图砝码外周导管T形撞杆底座2．大鼠脑损伤模型的建立月龄、体重相似的健康雄性SD大鼠，按照随机化原则分为以下3组，轻度损伤组、中度损伤组及对照组。动物先在光／暗周期为12h／12h，光照时间(7：00-19：00)的条件下饲养适应7d，将大鼠提前3天单独喂养，术前禁食8h。实验时用10％水合氯醛以0．35ml／kg腹

3、腔内注射进行麻醉，俯卧位。消毒头部皮肤，正中切开，剥离骨膜，暴露左顶骨，在冠状缝后1．5mm，中线旁2．5mm处钻一直径5mm骨窗，保持硬膜完整。将撞杆置于硬膜上，用209砝码分别于10cm、30cm高处沿外周导管坠落，撞击撞杆从而间接撞击硬膜，致右顶叶轻、中度脑挫裂伤。两种致伤冲击力大小为2009．cm、6009．cnl。打击后切口内滴注4万单位硫酸庆大霉素4．5滴，缝合头皮。对照组仅开颅窗，不施加打击‘7·盯。3．脑损伤程度的病理鉴定：对不同打击力度致脑损伤后3小时的大鼠进行麻醉后，用10％甲醛进行心脏灌流固定，随后打开颅腔完整取脑，甲醛固定2小时后进行病理切片HE染

4、色t7l。二．脑损伤大鼠水迷宫监测1．材料和方法1．1实验材料：普通级SD健康雄性大鼠，购自福建医科大学动物实验中心，体重(230土30)g；Morris水迷宫分析系统(福建医科大学神经生物中心)1．2实验方法：1．2．1SD大鼠经Morris水迷宫连续训练5天，使大鼠达到成模指标(平均潜伏期小于5s；平均运行时间小于15s；正确率大于90％)。剔除未达到成模指标的大鼠，然后将符合指标的大鼠随机分为3组：对照组、轻度组、中度组；于伤后1d开始检测SD大鼠的学习记忆能力。1．2．2Morris水迷宫的检测实验前将大鼠置于站台上适应20S，随后将大鼠随机从不同象限(靶象限除9

5、外)面壁置人池内，大鼠登上站台5S后终止记录，最长记录时间为120S，若大鼠在120S内不能上台，引导其登上站台适应10S，最后将大鼠擦干放人鼠笼。监测并记录大鼠找寻水下平台的时间，以检验大鼠对远期记忆的保持情况‘!’9’1盯。连续7天在同一时间对大鼠寻找水下平台时间进行记录，以检测大鼠脑损伤后的记忆能力。三．脑损伤后乙酰胆碱转移酶的活性改变l材料与方法1．1材料：普通级SD雄性大鼠66只(购自福建医科大学动物实验中心)，体重(230土30)g；721型分光光度计(上海)；乙酰胆碱转移酶试剂盒(南京建成生物工程研究所)1．2实验方法：1．2．1实验动物分组：将SD大鼠随机

6、分为对照组(6只)、轻度脑损伤组和中度脑损伤组(每组各30只)，脑损伤模型制成后分笼喂养并自由进食饮水。1．2．2检测指标：分别在脑损伤模型制成后1d、2d、3d、5d、7d，脱臼处死大鼠，每个取样时间点大鼠为6只。开颅，分别取额叶皮层、海马、基底前脑处部分脑组织，将剪碎的脑组织置入玻璃匀浆管中，在一定比例的冷生理盐水中匀浆，匀浆液取出进行乙酰胆碱转移酶含量的测定。1．2．3乙酰胆碱转移酶检测使用分光光度计测量吸光度，然后通过公式换算成浓度值。乙酰胆碱转移酶试剂盒具体使用步骤按产品说明书所示操作。1．2．4数据处理：记录选定时间点的不同部位脑组织中乙酰胆碱转移酶含量数据并

7、保存。所有结果用(；±s)表示，并斥]SPSSl2．o统计软件处理数据，分析大鼠在脑损伤后不同时间点的乙酰胆碱转移酶含量变化趋势。四．脑损伤后脑神经细胞黏附因子含量的变化lO1．材料与方法1．1材料：普通级sD雄性大鼠66只(购自福建医科大学动物实验中心)，体重(230土30)g；全自动酶标读数仪(BioRAD550型，美国)；大鼠神经细胞黏附因子ELISA试剂盒(SantaCruz公司)1．2实验方法：1．2．1实验动物分组：将SD大鼠随机分为对照组(6只)、轻度脑损伤组和中度脑损伤组(每组各30只)，脑损伤模型制成后分笼喂