三聚氰胺的毒性研究

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1、·216·毒理学杂志2008年6月第22卷第3期JToxicolJune2008Vol122No13中图分类号:R99413文献标识码:A文章编号:1002-3127(2008)03-0216-03·实验研究·三聚氰胺的毒性研究11,2111林祥梅,王建峰,贾广乐,梅林,王众(11中国检验检疫科学院动植物检疫研究所,北京100029;21南京农业大学动物医学院)关键词:三聚氰胺;细胞毒性实验;急性毒性;亚急性毒性实验;肾衰竭2007年3月中旬以来,美国发生4000多起猫、狗行孔,继续培养20h后加入MTT,每孔20μl,再培养4[122]等宠物中毒死亡事件。美国食品药品管理局从进h,

2、弃去液体后加入100μlDMSO震荡10min,立即在酶口的部分小麦蛋白粉和大米蛋白粉中检出三聚氰胺等标仪570nm波长处测各孔A值。同时设对照组。重成分。三聚氰胺多用于生产塑料和肥料,还可制造药复上述实验三次。[325]物胶囊。在动物饲料中添加三聚氰胺,可提高饲料细胞活力存活率%=((样品A值-空白组A的氮含量,让人误以为该饲料的蛋白质比较丰富,但目值)P(阴性对照A值-空白组A值)×100%。前还没有被认定有害人体健康,有关它和其他物质混11312三聚氰胺的急性毒性试验:称取需要的三聚氰合后对动物产生何种影响的资料报道甚少。本试验通胺量,用研钵研磨后加蒸馏水到所要求的浓度。选择过

3、对三聚氰胺的细胞毒性、急性毒性和亚慢性毒性研健康小鼠,采用灌胃方式从低剂量给药,每组6只小鼠究,客观评价动物长时间接触该化合物的危害性,以及(雌雄各半),观察48h。小鼠死亡后剖解观察。为中毒动物的治疗提供理论基础。11313三聚氰胺的亚慢性毒性试验:将试验猫随机分为2组,每组3只,按照美方提供的饲料中三聚氰胺含1材料与方法量为214g进行添加,采用30d连续喂养试验,并于饲111材料BHK细胞(由中国人民解放军事医学科喂后第6、9、15、23、30d采血做生化指标检查。实验结学院提供);昆明小鼠,清洁级,体重18g～22g,雌雄各束后将实验猫处死,取肾脏固定于体积分数为5%的半,(

4、购自中国人民解放军军事医学科学院实验动物中甲醛中1～3h,常规石蜡制片。心);成年健康猫(购自北京大学医学部实验动物中114统计学方法IC50是将细胞存活率对浓度对数作心)。图,按作图法用ED50andIC50FORGradedResponse(Ver112主要仪器与试剂三聚氰胺(北京化学试剂公112,日本H1Ono开发)程序计算出IC50。司),DMEM培养液,胎牛血清(美国GIBCO公司),MTT溶液(美国Sigma公司),倒置相差显微镜(Dmil2结果型,美国leica公司),酶标仪(Accent型,美国Thermo211MTT法测定结果不同浓度的样品对BHK细胞公司),CO2

5、培养箱(3111型,美国Thermo公司),生化作用24h后,MTT法测定A570,计算细胞的存活率,结分析仪(saba18意大利),石蜡切片机(Leica美国)。果见表1。统计分析结果表明,三聚氰胺在高浓度时113方法(≥11667mgPml)与细胞存活率显著相关(P<0105),11311三聚氰胺对BHK细胞的毒性试验:将三聚氰计算IC50为10111mgPml。胺用培养液加热搅拌溶解,甘油助溶,配成5mgPml的212三聚氰胺急性毒性实验结果最高剂量组给药溶液然后在无菌条件下进行3倍稀释备用。将对数生后9h,小鼠开始出现不安,呼吸急促,随后在几十min长期的BHK细胞消化、计数

6、,用含体积分数为10%的内死亡。其他剂量组小鼠仅见精神不振,反应迟钝,闭4胎牛血清的DMEM培养液配成浓度为5×10个Pml的眼伏卧,不食等症状,随后在24～48h出现个别死亡。细胞悬液,按200μlP孔的密度接种于96孔培养板,37灌胃死亡的小鼠输尿管中均有大量晶体蓄积,部分小℃、5%CO2温箱培养使细胞贴壁。24h后弃去旧培养鼠肾脏被膜有一层晶体。其他脏器未见有明显的变液,加入不同浓度的样品200μl,每个稀释度作5个平化。三聚氰胺急性毒性实验小鼠死亡情况见表2,三作者简介:林祥梅,副研究员,研究方向:动物检疫。聚氰胺的全部不致死的最大剂量大于5000mgPkg。毒理学杂志200

7、8年6月第22卷第3期JToxicolJune2008Vol122No13·217·表1三聚氰胺细胞毒性测定结果(MTT法)三聚氰胺阳性对照(SDS)样品浓度细胞活力细胞活力(mgPml)A值A值存活率(%)存活率(%)50.355±0.03155124003116670.475±0.006731803003015560.589±0.017911030.003±0.014016833011850.590±0.036911540.063±0.01191126