云南省德宏州hcv分子流行病学研究及黑猩猩samhd1表达载体的构建与真核表达

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1、云南省德宏州HOV分子流行病学研究及黑猩猩SANHDl表达载体的构建与真核表达MolecularEpidemiologyofHCVinDehong，Yunnan，ChinaandexpressionofSAMHDlcpzin293Tcells姓2014年6月独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已注明引用的内容以外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果，也不包含为获得江苏大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。

2、对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：黼们脚年6月昌日学位论文版权使用授权书江苏大学、中国科学技术信息研究所、国家图书馆、中国学术期刊(光盘版)电子杂志社有权保留本人所送交学位论文的复印件和电子文档，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。本人电子文档的内容和纸质论文的内容相一致，允许论文被查阅和借阅，同时授权中国科学技术信息研究所将本论文编入《中国学位论文全文数据库》并向社会提供查询，授权中国学术期刊(光盘版

3、)电子杂志社将本论文编入《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》并向社会提供查询。论文的公布(包括刊登)授权江苏大学研究生处办理。本学位论文属于不保密口。学位论文作者签名：张0苘侑伽J叶年6月暑Et指导教师签名：≠老蜡≯崎6月g日江苏大学硕士学位论文摘要丙型肝炎病毒(HepatitisCVirus，HCV)能感染人肝脏细胞，引起急性和慢性的肝炎，严重威胁人类健康。根据核苷酸序列的差异，HCV可分为6个基因型，而每个基因型又可分为很多亚型。HCV基因型分布具有明显的地域性差异，其中基因型1、2、3在全球

4、普遍流行，而基因型4、5、6的分布范围较窄，呈现出地方性流行。在我国主要流行基因型1、2、3和6。HCV的传播与毒品转运途径密切相关，静脉吸毒已成为HCV传播的一个重要途径。位于中缅边境的德宏傣族景颇族自治州是中缅之间重要的通商口岸，贸易交流频繁，也是毒品从生产基地“金三角”向中国内陆及其他邻近国家转运的重要通道，德宏也成为HCV感染的重灾区。因此，对德宏地区静脉吸毒人群深入进行分子流行病学调查，了解德宏静脉吸毒人群HCV分子流行病学特征和传播趋势，对制定HCV防控策略具有重要的参考价值。在本研究

5、中我们筛查的德宏静脉吸毒者的血液样品中共有264份为HCV阳性样品。经过病毒RNA抽提，反转录巢式PCR扩增C／E2、NS5B片段和测序，分别对获得的C／E2序列和NS5B序列进行系统进化分析，确定其基因型。最终共获得190份HCV阳性样本的序列，包括180条C勉和152条NS5B片段序列。分型结果显示，190份样品中1a亚型17例、1b亚型2例、3a亚型16例、3b亚型69例、6n亚型32例、6u亚型28例，另外1例疑似双感染或重组，有5例为新亚型6X。通过对德宏和其它地区HCV基因型分布的比较

6、发现，德宏HCV基因型分布与其它地区显著不同，其中3b亚型所占比例明显高于其它地区，而1b亚型检出率很低。值得注意的是，德宏HCV6u亚型所占比例高达15％。6u亚型病毒最初是2008年由一株来自德宏的分离株经全基因组测序后命名的，系统进化分析显示该毒株能与之前两株来自缅甸的病毒株聚集在一起，此后在中国其他地区陆续发现新的6u病毒株，但流行率都很低(低于2％)。因此6u亚型病毒在德宏的高流行率表明德宏可能是6u亚型的起源地或者是6u亚型从缅甸向中国内陆传播的入口。此外，从系统进化树上可以看出，有5

7、个分离株聚集在亚型6m和6n之间，随后通过遗传距离分析确定其为新的亚型6x。与数据库中其他聚集在6m和6n之间的未分型的序列DH027一起构建系统发生树发现，这五云南省德宏州HCV分子流‘行煽学刃院及黑猩猩SAMHDl表达戴体的构建与真核表达个6x亚型的分离株不能和DH027聚集在一起。由于DH027同样来自于德宏，说明HCV基因型6在德宏的流行情况极其复杂，还存在很多未知的新亚型。HIV与HCV享有相同的传播途径，我们对HIV的关注点在于其病毒辅助蛋白与限制因子的相互作用上。SAMHDl是最新发

8、现的HIV限制因子，能限制HIV-1对髓系细胞的感染，但是其限制作用被HIV-1的辅助蛋白Vpx拮抗，原因是Vpx能诱导SAMHDl进入宿主细胞蛋白酶体降解。对灵长类SAMHDl和慢病毒辅助蛋白Vpx及Vpr的研究发现，慢病毒辅助蛋白Vpx／Vpr诱导SAMHDl降解具有种属特异性。运用祖先状态构建和时空动力学分析，发现灵长类SAMHDl与慢病毒Vpx的共进化导致在HIV-1祖先病毒中vpx基因的丢失。我们推测HIV-1祖先病毒中vpx基因的丢失很可能与黑猩猩SAMHDl的功能和选