复方土茯苓颗粒制剂学及初步药效学研究

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1、南方医科大学201l级硕士学位论文复方土茯苓颗粒制剂学及初步药效学研究Pharmaceuticandpreliminarypharmacodynamicstudyof1，n●●■●●C0mp0UndlUIUIlnggranUIe课题来源：广东省科技计划项目(2011A080300004)学位申请人导师姓名专业名称培养类型培养层次所在学院刘伟吴新荣药剂学学术型硕士研究生研究生学院2014年3月20日广州硕士学位论文复方土茯苓颗粒制剂学及初步药效学研究硕士研究生：刘伟指导教师：吴新荣摘要高尿酸血症(hypemrice商a，

2、HUA)是一种嘌呤代谢异常，血液尿酸水平异常升高的遗传相关性疾病。主要病因是体内尿酸的排泄减少和(或)生成增加。尿酸是嘌呤核苷酸类和游离碱基转化过程中的最终酶产物，肾脏有机阴离子转运体在维持体内尿酸的重吸收与分泌之间的平衡有显著性意义。尿酸的重吸收和分泌之失衡是导致高尿酸血症的主要原因。西药治疗高尿酸血症效果明显，但大多有严重的副作用产生，使得在临床的应用受到局限。然而中药治疗高尿酸血症，能够在体内发挥多靶点作用，平衡体内尿酸的重吸收与分泌，疗效确切，副作用小。复方土茯苓颗粒为广州军区广州总医院医院制剂，是治疗高尿酸血

3、症的常用方，由土茯苓、牛膝、王不留行、山慈菇等药材制成。土茯苓作为君药，主要含有二氢黄酮类，如落新妇苷、异落新妇苷，有效成分落新妇苷有抗炎、利尿作用。牛膝作为臣药，主要含有甾酮类，如p．蜕皮甾酮、牛膝甾酮，有效成分D．蜕皮甾酮有促进蛋白合成，免疫调节作用。复方土茯苓颗粒方主要通过泄浊祛邪、化湿清热的作用，达到治疗高尿酸血症和痛风病的效果。前期，课题组己对本方做了大量的试验研究，制定了初步提取工艺、质量标准研究，通过有效部位总黄酮、总皂苷的分离，研究有效部位对尿酸转运蛋白1和黄嘌呤氧化酶活性抑制，证明了药物体外药理学机制

4、。通过动物试验证明了复方土茯苓颗粒初步药效学，为新药研发提供了试验基础。本课题对该制剂按照国家中药新药申报要求，在制剂学、质量标准等方面进行研究。中文摘要目的优化复方土茯苓颗粒提取、澄清、成型工艺，确立最佳制备工艺，节约成本，在中试放大实验中操作稳定可行；建立复方土茯苓颗粒质量标准，通过落新妇苷、B．蜕皮甾酮、总黄酮含量测定，用于复方土茯苓颗粒质量控制；研究复方土茯苓颗粒初步药效学，从体外药效学方面研究新工艺可行，为复方土茯苓颗粒申请新药奠定基础。方法1．复方土茯苓颗粒提取工艺研究采用Box．Behnken效应面法，应

5、用HPLC、UV，以落新妇苷提取率、总黄酮提取率和出膏率的总评“归一值”为因变量，通过对提取次数、提取时间、加水量因素各水平进行多元线性回归及二项式拟合，考察提取因素的影响，优选复方土茯苓颗粒提取工艺条件。2．ZTCl+1．II用于复方土茯苓颗粒提取液的澄清工艺研究应用HPLC、uV的方法，以落新妇苷保留率、总黄酮保留率为评价指标，分别考察药液浓度、澄清剂用量、加入澄清剂A组分或者B组分时药液温度、搅拌速率、保温时间及静置时间对澄清效果的影响。在单因素分析的基础上，应用正交实验设计优化澄清工艺条件，确定ZTCl+1．I

6、I天然澄清剂用于复方土茯苓颗粒提取液澄清的最佳工艺。通过落新妇苷保留率、总黄酮保留率的计算，与原有的醇沉工艺进行比较研究。3．复方土茯苓颗粒成型工艺研究首先考察辅料的用量，通过颗粒质量检查、吸湿性、流动性研究，确定辅料用量。然后，以溶化性、合格率、落新妇苷含量、总黄酮含量的总评“归一值”为因变量，通过对混合辅料比例(糊精：可溶性淀粉)，辅料倍数(混合辅料与稠膏比)，乙醇浓度，干燥温度为主要影响因素，对因变量进行多元二次项回归拟合，采用星点设计．效应面法优选复方土茯苓颗粒成型工艺。4．复方土茯苓颗粒质量标准研究采用薄层色

7、谱(TLC)法以对照药材、阴性对照品为对照对方中试产品中土II硕士学位论文茯苓、牛膝的定性鉴别；采用高效液相色谱法(HPLC)对方中的主要有效成分落新妇苷、p一蜕皮甾酮进行含量测定，制定制剂中落新妇苷的含量限度范围，落新妇苷含量测定：色谱条件：AgilentHC．C18柱(4．6IIⅡIl×250mm，5pm)，流动相：乙腈．水(20：80)，流速1m1·min～，检测波长290啪，柱温30℃，进样量10ul。p-蜕皮甾酮含量测定：色谱条件，AgilentHC．C18柱(4．6衄n×250111111，5岬)；流动相：

8、乙腈．水(17：83)；流速：1mL·min～，柱温：30℃，检测波长：243nm。通过色谱条件的筛选，方法学验证，建立稳定可行的含量测定方法。采用紫外分光光度计(UV)法对方中的主要有效部位总黄酮进行含量测定，制定制剂中总黄酮的含量限度范围，建立稳定可行的质量标准。5．复方土茯苓颗粒初步药效学比较研究培养小鼠肾小管上皮细胞(I汀