mu阿片受体与tlr4信号通路交互调节在肝脏缺血再灌注损伤中的分子机制

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1、硕士学位论文论文题目mu阿片受体与TLR4信号通路交互调节在肝脏缺血再灌注损伤中的分子机制陈蔡旸研究生姓名指导教师姓名俞卫锋专业名称麻醉学研究方向围术期肝保护论文提交日期2013年5月mu阿片受体与TLR4信号通路交互调节在肝脏缺血再灌注损伤中的分子机制中文摘要mu阿片受体与TLR4信号通路交互调节在肝脏缺血再灌注损伤中的分子机制中文摘要背景肝脏缺血再灌注(hepaticischemiareperfusion，HIR)损伤是临床常见的病理生理过程，多见于肝脏外科相关手术（包括肝移植、肝叶切除等）及

2、休克，腹部外伤等。目前，肝脏IR损伤后发生的肝功能障碍仍然是临床上急需解决的一个问题，如何防治这类损伤是围手术期肝保护相关领域的热点。大量研究表明TLR4炎症通路与内源性损伤相关蛋白HMGB1在肝脏缺血再灌注损伤的发生发展中占据重要地位。阿片受体激动剂的器官保护作用在心脏、神经系统中进行了深入的研究，但是有关阿片受体的肝保护作用仍鲜有报道。我们课题组前期研究已证明，阿片类药物预处理能通过NOS/NO通路有效减轻肝IR损伤。本研究旨在进一步探讨mu阿片受体的激活下调TLR4炎症相关信号通路在肝脏IR

3、损伤中的机制。方法1.采用小鼠70%肝脏缺血再灌注损伤模型，比较假手术组、缺血再灌注对照组、mu阿片受体激动剂预处理组、mu阿片受体激动剂对照组之间血清中转氨酶、肝脏组织结构变化的差异以及TNF-α、IL-6mRNA水平。为观察mu阿片受体在阿片类药物预处理肝保护中的作用，随机分为六组，比较假手术组、缺血再灌注对照组、mu阿片受体激动剂预处理组、mu阿片受体拮抗剂处理加激动剂预处理组、mu阿片受体拮抗剂处理组、mu阿片受体拮抗剂对照组。比较各组之间再灌注后血清中转氨酶、肝脏组织结构变化的差异以及T

4、NF-α、IL-6mRNA水平。2.1检测Kupffer细胞相关MCP-1、MIP-2mRNA表达，免疫组织化学染色检测Kupffer细胞标志物（F4/80）表达；采用氯化钆清除小鼠肝脏Kupffer细胞，观察mu阿片受体在阿片类药物预处理肝保护中的作用，参照上述分组，比较各组之间再灌注后血清中转氨酶、肝脏组织结构变化的差异以及TNF-α、IL-6mRNA水平。I中文摘要mu阿片受体与TLR4信号通路交互调节在肝脏缺血再灌注损伤中的分子机制2.2观察小鼠巨噬细胞系RAW264.7在缺氧复氧处理后T

5、LR4及其下游相关信号通路p-IkB、p-NF-kB蛋白表达活化情况，以及p-NF-kB的入核现象及胞内定位。3.采用TLR4基因敲除老鼠与野生鼠对照，参照以上处理，观察缺血再灌注损伤后血清TNF-α、IL-6水平；TLR4重要内源性配体HMGB1缺血再灌注损伤后的胞内定位；HMGB1中和抗体对肝脏缺血再灌注损伤后血清TNF-α、IL-6水平的影响；分离TLR4基因敲除老鼠与野生鼠腹腔巨噬细胞（PBMC），采用siCamkⅣ转染PBMC，观察缺氧复氧处理后的HMGB1释放。结果：1.肝脏缺血再灌注

6、后，mu阿片受体激动剂中、高剂量（RPC2、3）组缺血再灌注损伤后ALT、AST水平较IR组均显著降低；组织形态学显示肝细胞坏死及中性粒细胞浸润情况减轻。拮抗阿片受体后，NLX/RPC组缺血再灌注损伤后ALT、AST水平较mu阿片受体激动剂（RPC）组显著升高，NLX组缺血再灌注损伤后ALT、AST水平较IR组显著升高，组织形态学变化亦同上，TNF-α、IL-6mRNA水平变化同血清学变化。2.1缺血再灌注后肝脏组织中MCP-1、MIP-2mRNA水平逐渐增高，mu阿片受体激动剂预处理（RPC）组

7、较缺血再灌注（IR）对照组下降；IR组小鼠肝脏Kupffer细胞的活化要明显高于sham组、agonist组；RPC组小鼠肝脏Kupffer细胞的活化较IR组有明显减弱。氯化钆处理后，拮抗阿片受体（GdCl3+IR）组血清ALT、AST水平较处理前（IR）组有显著下降，组织病理学变化亦同上；氯化钆处理后，（GdCl3+IR）组及其余各组肝脏组织中TNF-α、IL-6mRNA水平，较处理前（IR）组有显著下降。2.2小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞缺氧复氧处理后，TLR4蛋白表达较sham组增高；

8、给予阿片受体激动剂预处理后，TLR4蛋白表达下降，但仍高于sham组；拮抗阿片受体后，TLR4蛋白表达再次增高；p-IkB蛋白表达较sham组增高；给予阿片受体激动剂预处理后，p-IkB蛋白表达下降，但仍高于sham组；拮抗阿片受体后，p-IkB蛋白表达再次增高；p-NF-kB蛋白表达较sham组增高；给予阿片受体激动剂预处理后，p-NF-kB蛋白表达下降，但仍高于sham组；拮抗阿片受体后，p-NF-kB蛋白表达再次增高。阿片受体与TLR4之间可能存在的某些相互作用，影响了TLR