柔嫩艾美耳球虫多肽n-乙酰氨基半乳糖转移酶2的基因表达及转录动态分析

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1、柔嫩艾美耳球虫多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2的基因表达及转录动态分析刘晓丽龚振兴马雪婷曲自刚韩政岚刘保红袁如意杨孝朴蔡建平甘肃农业大学动物医学院中国农业科学院兰州兽医研究所/家畜疫病病原生物学国家重点实验室/甘肃省动物寄生虫病重点实验室江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心摘要：蛋白质翻译后0-糖基化修饰普遍存在于真核牛物、细菌和古细菌，多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2(polypeptide:N~acety1galactosaminy1transferase2,ppGalNAc-T2)是0-糖基化反应的限速酶。基因组数据分析揭示艾美耳球虫具有0-糖基化反应途径

2、。为研究柔嫩艾美耳球虫(Eimeriatcnella)蛋口质翻译后糖基化修饰及其关键酶的药靶效用，对EtppGalNAc-T2基因进行了克隆，并检测其在E.tenella不同发育阶段的表达动态。根据EuPathDB中所预测EtppGalNAc-T2基因序列设计引物，以RT-PCR方法扩增获得EtppGalNAc-T2的ORF,插入酶切位点后连接到原核表达载体pGEX-6p-l进彳亍诱导表达。提取E.tenellci广东株未抱子化卵囊、抱子化7h卵囊、孑包子化卵囊、子抱子和第二代裂殖子5个发育阶段的总RNA,以qRT-PCR法检测EtppGalNAc-T2转录水平的动态变化

3、。结果表明，EtppGalNAc-T2的全长ORF为1983bp,编码660个氨基酸，在E.coliTransetta(DE3)可溶性表达。qRT-PCR结果显示，EtppGalNAc-T2转录水平随发育阶段不同而有显著差异，子抱子阶段表达水平最高、而在抱子化卵囊则几近不能检出。结果为进一步研究EtppGalNAc-T2的功能提供了试验基础。关键词：柔嫩艾美耳球虫;ppGZc-T2;基因克隆;表达差异;qRT-PCR;作者简介：刘晓丽(1988-),女，甘肃会宁人，硕士生，主要从事球虫病研究，E-mail:1iuxlil525@163.com作者简介：蔡建平，研究员，博导

4、，主要从事球虫病和猪禽肠道健康研究;E-mail:caijianping@caas.cn;作者简介：杨孝朴，教授，硕导，主要从事动物生化教学和研究,E-mail:yangxpu@gsaii・edu.cn收稿日期：2017-05-22基金：国家自然科学基金(31272554)ExpressionProfilingofPolypeptide:N~acetylgalactosaminyltransferaseT2duringEimeriatenellaDevelopmentalCycleLIUXiao-liGONGZhen-xingMAXue-tingQUZi-gangHANZ

5、heng-lanLIUBao-hongYUANRu-yiYANGXiao-puCAIJian-pingCollegeofVeterinaryMedicine,GansuAgriculturalUniversity;StateKeyLaboratoryofVeterirmryEtiologicalBiology/KeyLaboratoryofVeterinaryParasitologyofGansuProvince/LanzhouVeterirmryResearchInstitute,ChineseAcademyofAgriculturalSciences;Abstract

6、：0-1inkedglycosylationisaformofproteinposttranslationalmodificationsthatoccursintheGolgiapparatusofeukaryotes,andarchaeaaswel1asbacteria.Polypeptide:N~acetylgalactosaminyltransferase2(ppGcilNAc-T2,EC2.4.1.41)isthefirstkeyenzymeinthepathwayofO-glycanbiosynthesis.WholegenomesequencingofEime

7、riaspphaseverrevealedthattheseprotozoapossessthepathwaysfor0-glycansynthesisand0-1inkedglycosylationofproteins.ForexploringtheprofilesofglycosylationintheglobalproteomeofEimeriatenelladuringdevelopmentalcycle,emdthepotentialdruggabletargetofEtppGalNAc_T2,wehaveclone