土贝母苷甲诱导k562细胞分化的实验研究

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1、湛江海洋大学硕士学位论文土贝母苷甲诱导K562细胞分化的实验研究姓名：高营申请学位级别：硕士专业：水产品加工及贮藏工程指导教师：于立坚;马润娣20040601独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果尽我所知除了文中特别加以标注和致谢的地方外论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果也不包含为获得本校或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意研究生签名时间年月日2英文缩略语BSAbovineserumalbumin牛血清白蛋白DMSOdimethylsulphoxide二甲基亚

2、砜DTTDithiothreitol二硫苏糖醇EDTAethylenediaminetetraaceticacid乙二胺四乙酸EPOErythropoietin红细胞生成素EPO-Rerythropoietinreceptor红细胞生成素受体HbHemoglobin血红蛋白HGFhematopoieticgrowthfactor造血生长因子HSChematopoieticstemcell多能造血干细胞K562erythroleukemiacellline人红白血病细胞株PAGEpolyacrylamidegelelectrophoresis聚丙烯酰胺凝胶电泳PASperiodicacid-s

3、chiffreaction过碘酸雪夫反应PBSphosphatebufferedsaline磷酸盐缓冲溶液PMSFphenylmethylsulfonylfluoride苯甲基磺酰氟POXMyeloperoxidase髓过氧化物酶SDSsodiumdodecylsulfate十二烷基硫酸钠SDS-PAGESDS-polyacrylamidegelelectrophoresisSDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳TEMEDN,N,N’,N’,-tetramethylethylenediamineN,N,N’,N’-四甲基乙二胺á-NAEá-naphthylacetateesteraseá醋酸萘酯4土贝母

4、苷甲诱导K562细胞分化的实验研究研究生高营导师于立坚研究员马润娣研究员湛江海洋大学广东省海洋药物重点实验室摘要背景与目的白血病是严重危害人类生命健康的造血系统恶性肿瘤其生物学特征是造血细胞增殖失控分化成熟受阻正常凋亡过程发生障碍以致异常分化的细胞大量增殖迄今白血病的治疗仍主要采用传统的大剂量联合化疗但此疗法副作用甚大复发率很高尤其对机体免疫与造血系统有极大损害研究恶性肿瘤尤其是白血病细胞的诱导分化及逆转机制已成为当今生物医学领域内最热点的前沿课题之一在众多的研究中中药以其增强免疫功能攻补兼施毒副作用小注意整体应用范围广泛的优越性得到了广泛认可和重视从祖国医学宝库中寻找出既能促进正常造血又能

5、抑制白血病细胞恶性增殖并诱导其向成熟方向分化的天然诱导分化剂已成为白血病的希望和重要途径人红白血病细胞株K562是1975年由Lozzio等从慢性髓性白血病急变期的病人胸水中获得并建株的该细胞起源于骨髓原始多能干细胞1979年Anderson等研究了K562细胞膜表面结构发现有人骨髓红细胞上特有的糖蛋白故认为该细胞株属人红白血病细胞在药物等诱导因素作用下可向红系粒系和巨核系细胞分化是研究细胞增殖与分化的理想模型土贝母[BolbostemmapaniculatumMaxim.Franquet(Cucurbitaceae)]是一种传统中药载于清代赵学敏编著的本草纲目拾遗古代用它的块茎来治疗乳岩乳

6、痈乳腺增生和瘰疬等疾患四川省和陕西省的老中医用它来治疗食道癌和胃癌效果显著但因恶心呕吐等消化道副作用而限制了它的临床应用我们从1978年开始从生药土贝母中分离纯化抗癌活性成分并对其中得率最高1.9%水溶性和稳定性较好的土贝母苷甲的药效学药代动力学毒理学及其作用机制进行了较系统的研究5本文试图研究土贝母苷甲对K562细胞的诱导分化作用并探讨其可能的机理方法1.采用台盼蓝拒染法研究土贝母苷甲对K562细胞增殖的影响2.通过瑞氏吉姆萨染色光镜观察研究经土贝母苷甲诱导后K562细胞形态学的改变3.细胞化学染色检测细胞内血红蛋白过氧化物酶糖原及非特异性酯酶含量的变化4.Westernblotting法

7、检测经土贝母苷甲诱导后K562细胞基因c-mycc-fos表达蛋白产物的变化结果:-11.通过土贝母苷甲作用K562细胞的浓度时间曲线发现410ìmol·L土-1贝母苷甲能抑制K562细胞的增殖810ìmol·L土贝母苷甲作用3天后细胞出现死亡细胞增殖受抑明显2.形态学观察发现经土贝母苷甲诱导后K562细胞核浆比例减小核内异染色质增多胞浆内特殊颗粒增多细胞趋向成熟分化3.细胞化学检测显示经土贝母苷甲诱导后K5