乳腺癌细胞stat3信号转导通路及和syk基因表达之间相互关系的研究

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1、河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺研究生签名：缘J嗜导师签章：鲜塌易二级学院领导手警l?≤≥‘矽ff年扫月‘·c叼丫o‘。研究生学位论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特别加以标注等内容外，文中不包含其他人已发表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。研究生签名：缮，J、苟翩蹲算缘盼I沙¨年歹月f口日目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

2、⋯⋯⋯⋯⋯．5研究论文乳腺癌细胞STAT3信号转导通路及与Syk基因表达之间相互关系的研究引言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1O第一部分RNA干扰沉默Sn玎3基因表达对人乳腺癌细胞生物学行为的影响前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1‘1日¨舌⋯⋯⋯⋯：⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯11结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．23附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．

3、26附表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．35讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．37小结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．38参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．38第二部分槲皮素诱导人乳腺癌细胞凋亡及与Syk基因表达之间相互。关系的研究前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯^⋯⋯⋯⋯⋯．41HU舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯．，⋯⋯⋯⋯⋯．．1材料与方法一⋯⋯⋯⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．

4、4l结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯44附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯46附表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯48讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯50小结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．‘⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．50参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．51结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．52综述RNA干扰技术的研究及进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯∥⋯⋯．．53致{射⋯⋯⋯⋯⋯

5、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．63个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．64中文摘要乳腺癌细胞STAT3信号转导通路及与Syk基因表达之间相互关系的研究摘要目的：槲皮素(Que)可诱导癌细胞氧化应激反应，检测在氧化应激条件下，对人乳腺癌细胞株MDA．MB．231和MDA．MB．231／Syk细胞凋亡的诱导作用及与Syk基因表达之间的相互影响。以STAT3为靶基因，设计并构建能够产生小发卡RNA(shRNA)的重组质粒载体，体外转染人乳腺癌细胞株MDA．MB．23

6、1和MDA．MB．231／Syk细胞并加以Que药物干预。通过体外实验，观察Syk与MDA．MB一231和MDA．MB．231／Syk细胞株STAT3表达之间的相互影响，来探讨其相关信号转导途径，为乳腺癌的基因治疗提供实验和理论依据。方法：1用逆转录．聚合酶链式反应(reverstranscriptionPCR，RT-PCR)、蛋白质印记技术(Westernblot)检测MDA．MB．231／Syk细胞Syk的表达。．2用RT-PCR分析槲皮素(209mol／L此浓度与预实验中所计算的IC50接近)

7、处理48小时后MDA—MB．231及MDA．MB．231／Syk细胞STAT3的表达情况：屎用免疫细胞化学技术检测pSTAT3在MDA．MB．231及MDA．MB．231／Syk细胞中的表达情况。3采用RNAi技术特异性沉默MDA．MB．231及MDA．MB．23l／Syk细胞中STAT3的表达，通过Westernblot技术和半定量RT-PCR法检测经RNAi作用后MDA．MB．231及MDA．MB．231／Syk细胞STAT3表达水平的变化；在荧光显微镜下观察细胞转染48h后的形态和荧光数，以判

8、断转染的效率；瑞士．吉姆萨染色观察细胞转染48h后细胞形态学变化。4经RNAi技术特异性沉默MDA．MB．231及MDA．MB．231／Syk细胞中STAT3的表达后，流式细胞技术分析对细胞凋亡的影响，通过半定量RT-PCR法检测细胞凋亡相关基因bcl．2和Bax表达的变化。5采用RNAi技术干预MDA．MB．231及MDA．MB．231／Syk细胞，并中文摘要设空白对照，干预24、48、72h后，分别用MTT(四甲基偶氮唑蓝)法分析细胞增殖情况。6通过划痕实验检测R