水稻xa7介导抗白叶枯病应答的信号途径研究

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1、万方数据SignalingpathwayofXa7toresistbacterialblightinriceBySUNQINGZHIADissertationSubmittedtoZhejiangNormalUniversityInpartialFulfillmentoftheRequirementFortheDegreeofMasterofScienceSupervisedbyMABoJUNCollegeofChemistry&LifeScience，ZhejiangNormalUniversityJinhua，3210

2、04，ChinaApril，2014万方数据本研究得到国家转基因重大专项(2013ZX08009003—001)和国家自然科学基金(31371593、3101130)的资助。ThisWorkWasSupportedbyTheNationalTransgeneticMajorProjectandNationalNaturalScienceFoundationofChina(NFSC)．万方数据水稻Xa7介导抗白叶枯病应答的信号途径研究摘要水稻白叶枯病(Bacterailblight)是由稻黄单胞杆菌白叶枯致病变种(Xanth

3、omonasoryzaepv．oryzae，Xoo)侵染所导致的一种细菌性病害，利用抗白叶枯病基因能有效地防治该病害。水稻抗白叶枯病基因Xa7是一个具有广谱抗性的显性基因，为了研究其在抗病应答中的信号途径机理，利用基因芯片分析了水稻IRBB7(含物7)和IR24(感病对照)接种白叶枯病菌24h、48h后的基因表达情况，发现IRBB7中有883个特异的差异表达基因，IR24中有3055个特异的差异表达基因。基因的差异表达从接菌后24h开始，此时IRBB7中有207个特异地差异基因，我们根据基因功能注释将其分为病程相关因子、转

4、录因子、信号传导类、基础代谢类和未知功能类。通过半定量R11．PCR和Realtime．PCR的进一步验证，发现一个未知功能的基因(Os0390853200)在Xa7抗病应答中被强烈诱导表达，但是却不受Xa21抗病应答的诱导；而且，在没有接菌的水稻各组织中，该基因的表达非常低(除根外)，接菌后在叶片的侵染处被迅速的诱导表达；这些结果表明这个基因可能是一个受Xa7特异性调控的基因。Os0390853200基因编码一个含有四次跨膜结构域的蛋白Tetraspanin，与动物的CD9／CD37／CD63抗原家族蛋白同源，在遗传进化

5、树中与拟南芥的Tetraspanin3(简称TET3)处于同一分枝，因此将该基因命名为OsTET3。通过PCR扩增，从IRBB7和IR24中都克隆了OsTET3基因及其启动子，产物测序后发现两品种间没有序列的差异性。我们构建了OsTET3基因的过表达载体pCAMBIAl300．Pr035,：：OsTET3，经农感菌转化到了水稻感病品种中花1l愈伤组织中，并获得了再生植株的小苗。同时，构建表达载体pCAMBIAl300-Pr03ss：：OsTET3：eGFP，发现在本氏烟中OsTET3可能定位在质膜上。这些研究结果为进一步分

6、析OsTET3基因的功能及其在Xa7应答途径中的作用，剖析Xa7抗病的信号途径奠定了坚实的基础。关键词：水稻；抗白叶桔病；Xa7；信号途径；OsTET3万方数据ABSTRACT¨万方数据ABSTRACTSignalingpathwayofXa7toresistbacterialblightinriceABSTRACTBacterialblightisonekindofbacterialdiseasecausedbyXanthomonasoryzaepv．Oryzae(Xoo)andtheuseofbacterialblig

7、htresistancegenescaneffectivelycontrolthedisease．Xa7ofriceisadominantgenewithabroad-spectrumresistancetoXoointeractingwithavrXa7．InordertostudythesignalingpathwayofdiseaseresistancemediatedbyXaT,weanalyzedtheexpressionlevelofgenesofIRBB7(containingXa7)andIR24(notc

8、ontainingXaT)at24hand48hafterinfectingwithPX086bymicroarray．Wefoundtherewere883genesdifferentiallyexpressedinIRBB7and3055genesinIR24．207differentiallyex