vwf-a3区单抗sz-123抑制人vwf与ⅰ型、ⅲ型和ⅳ型胶原的结合及其抗血小板黏附功能的研究

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1、硕士专业学位论文论文题目vWF-A3区单抗SZ-123抑制人vWF与Ⅰ型、Ⅲ型和Ⅳ型胶原的结合及其抗血小板黏附功能的研究研究生姓名姚拾秀指导教师姓名赵益明专业名称临床检验诊断学研究方向血液学（血栓与止血）论文提交日期2013年5月vWF-A3区单抗SZ-123抑制人vWF与Ⅰ型、Ⅲ型和Ⅳ型胶原的结合及其抗血小板黏附功能的研究中文摘要vWF-A3区单抗SZ-123抑制人vWF与Ⅰ型、Ⅲ型和Ⅳ型胶原的结合及其抗血小板黏附功能的研究中文摘要研究背景：近年来，随着我国人口老龄化程度日益加重，血栓性疾病成为最常见的死亡病因之一，且其发病率仍在不断

2、上升。而血栓性疾病中，动脉血栓引起的疾病因起病急，致残率及病死率高而受到广泛关注。动脉血栓的治疗主要是使用抗血小板药物治疗。临床广泛使用的第一代抗血小板药物包括阿司匹林、噻氯吡啶和氯吡格雷等，阿司匹林能阻断花生四烯酸途径，噻氯吡啶和氯吡格雷能选择性的抑制二磷酸腺苷（ADP）与其血小板受体结合，但这两类药物用于介入治疗时均容易发生“再梗”现象。第二代抗血小板药物包括Reopro和SZ-21，均为GPⅡb/Ⅲa拮抗剂，能阻断血小板血栓形成的最终环节,从而阻断血小板聚集的最后通路。虽然它们作用效果较强,但一些患者使用时会出现明显的出血副作用。

3、赵益明等之前报道了一株特异性针对vWF-A3区的单克隆抗体（monoclonalantibody，mAb）-SZ-123，为血管性血友病因子(vonWillebrandfactor，vWF)A3区鼠源性单克隆抗体，主要针对病理性血栓形成的第一步—血小板黏附，通过抑制血小板黏附来阻断病理性血栓的形成，但并不妨碍血小板聚集，从而减少出血的不良反应。目的：(1)本研究旨在通过单抗SZ-123对vWF分别在Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原上的结合抑制实验来研究单抗SZ-123对vWF在血管内皮下各型胶原的抑制作用，进一步阐明单抗SZ-123的抗血栓功能。(2)

4、通过用体外血管腔模型（FlowChamber）来模拟体内血管剪切力、温度等环境来研究单抗SZ-123的抗血小板黏附作用，也为将来开发基于单抗SZ-123的抗栓药物奠定基础。方法：I英文摘要vWF-A3区单抗SZ-123抑制人vWF与Ⅰ型、Ⅲ型和Ⅳ型胶原的结合及其抗血小板黏附功能的研究（1）首先用人胎盘Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原包板，加入正常人混合血浆与单抗SZ-123同时孵育后，再加入辣根过氧化物酶（horseradishperoxidase，HRP）标记的兔抗人vWF多克隆抗体孵育，四甲基联苯胺（Tetramethylbenzidine，TMB

5、）显色后，用酶标仪读取吸光度值（OD）。（2）乙酸酸化的人胎盘Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原分别包被在载玻片上，4℃过夜，经生理盐水洗涤后，用2%BSA-PBS封闭，备用。经肝素抗凝（40U/ml）的人全血2管，一管加单抗SZ-123，另一管加单抗非抑制性抗体SZ-34为阴性对照，37℃孵育10min，-1在37℃，1000S剪切力的小室中灌注，将经血小板黏附的载玻片表面用生理盐水灌注2次后，在倒置显微镜下观察黏附的血小板，并使用SlideBook软件分析血小板黏附率。结果：（1）vWF胶原结合抑制实验：结果表明SZ-123呈剂量依赖性地抑制人血浆中

6、vWF与Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原的结合反应，对Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原的抑制率分别为95%、96%及41%。（2）平板流动小室内血小板黏附实验（FlowChamber）：结果表明，在高剪切力条件下、37℃环境中，SZ-123能够抑制人血小板在Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原上的黏附作用。结论：（1）单抗SZ-123能够抑制人血小板在Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原上的黏附作用。（2）单抗SZ-123对人血浆vWF与人Ⅰ、Ⅲ型胶原的结合抑制率明显高于与Ⅳ型胶原的结合。（3）单抗SZ-123在高剪切力条件下具有较好的抗血小板黏附作用。为进一步开发基于单抗SZ-123的抗栓药物以及为更加深

7、入的研究血栓形成的机制提供理论依据。关键词：血管性血友病因子；胶原；血栓；vWF-A3区；单抗SZ-123；血小板黏附；作者：姚拾秀指导教师：赵益明IIvWF-A3区单抗SZ-123抑制人vWF与Ⅰ型、Ⅲ型和Ⅳ型胶原的结合及其抗血小板黏附功能的研究英文摘要StudyontheinhibitionofMAbSZ-123tovWFA3domainonthehumanvWFbindingtocollagentypeⅠ,typeⅢandtypeⅣanditsfunctionofanti-plateletadhesionAbstractBackg

8、round:Inrecentyears,thethromboticdiseaseshavebecomeoneofthemostcommoncausesofdeathandtheincidencerateis