骨髓间质干细胞与ⅱ型胶原修饰的 plga黏附性的观察论文

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1、骨髓间质干细胞与Ⅱ型胶原修饰的PLGA黏附性的观察论文【摘要】优化骨髓间质干细胞(bonemarroesenchymalstemcells，BMSCs)体外分离培养技术，改良生物材料聚乙醇酸-乳酸共聚物(polylactidecoglycolide，PLGA)的细胞黏附性，观察BMSCs与Ⅱ型胶原修饰的PLGA的黏附性。［方法］密度梯度离心法分离BMSCs，流式细胞分析法(FACS)对细胞表面抗原、细胞活力、细胞周期进行检测，相差显微镜观察细胞形态。相分离法制做PLGA，Ⅱ型胶原进行表面修饰.freel，与BMSCs有较好的黏附性。［结论

2、］BMSCs可在体外长期、稳定培养，是理想的组织工程种子细胞。Ⅱ型胶原表面修饰的PLGA与干细胞有较好的黏附性，可用来做组织工程生物材料。【关键词】骨髓间质干细胞PLGA组织工程Abstract：［Objective］Toexploreamethodforisolatingandculturingbonemarroesenchymalstemcell(BMSCs)invitro,andimprovethecellularconglutinationabilityofbiomaterialpolylactidecoglycolicaci

3、d(PLGA),andobservertheadhesionofBMSCsculturedonPLGAmodifiedetrymethod,andcellularconfigurationicroscope.PLGAadebyphaseseparation,andodifiedaterialicroscope.［Result］BMSCscouldbeisolatedandculturedinvitro,andexpressCD29,CD44,CD106,butnotexpressCD34,CD45.Thecelllivingnessorph

4、ologyeterofPLGAmodified,.freele,andisgoodseminalcelloftissueengineering.ⅡcollagencanimprovethecellularadhesionofPLGA,PLGAmodifiedaterialoftissueengineering.Keyarroesenchymalstemcell;PLGA;tissueengineering组织工程修复受损组织的基本方法就是将种子细胞种植于生物支架材料上，经体外培养一定时间后再植入体内达到修复和重建受损组织的目的，所以细胞与生

5、物支架材料的黏附性就成了构建组织工程化组织和器官的关键问题之一。本研究将体外提纯，扩增的BMSCs种植到经Ⅱ型胶原修饰的PLGA材料上联合培养，扫描电镜观察其黏附情况，观察Ⅱ型胶原修饰的PLGA材料的细胞亲和性，探索以BMSC为种子细胞，以Ⅱ型胶原修饰的PLGA为生物支架材料构建组织工程的可行性，为临床组织工程的应用研究提供理论和实验数据。1材料和方法1.1材料和仪器SD大鼠(广东省动物中心)；PLGA(济南迈康公司，分子量10万单位)；胎牛血清(FBS)、淋巴细胞分离液(天津TBD公司)；DMEM(Dulbecdominimumessen

6、tialmedium)干粉培养基、胰蛋白酶、Ⅱ型胶原(Sigma公司)；流式细胞仪FACSAria(美国BD公司)；CD29FITC、CD44FITC、CD106PE、CD34PE和CD45FITC(Ancell公司)；PI(Sigma公司)；扫描电镜(日立公司，日本)。1.2PLGA的制备合成及扫描电镜观察70∶25的PLGA溶解于二氧六环匀速搅拌3h，溶液浇铸平皿上，-20℃放置过夜，放入质量比为30∶70的酒精溶液中萃取8h，连续3次，将结块样品放入真空机冷冻干燥。制备成10mm×10mm×5mm大小的样品，将上述得到的样品10个放入

7、含5mgⅡ型胶原的5mlPBS溶液中振荡混合1h，入真空机冷冻干燥。质量法测定其孔隙率［1］。取小块PLGA材料，固定于2％的戊二醛24h，0.1mol/LPBS(pH7.2)洗3次，不同梯度酒精逐级干燥，样品镀金，电镜扫描。1.3BMSCs的体外培养1个月龄SD大鼠，脱颈处死，取双侧股骨，剔净软组织，75％酒精浸泡消毒5min，PBS洗2次，剪断股骨一端后，用带5号针头的注射器将体积分数为10％胎牛血清的DMEM(含100U／ml青霉素、100μg／ml链霉素和20U／ml肝素)冲洗股骨骨髓腔，取混合骨髓液4ml缓慢注入事先准备好的含6m

8、l的淋巴细胞分离液的离心管内，800g离心20min，取出中间层的单核细胞接种于25cm2培养瓶，37℃、5％CO2培养箱静置培养。5d后首次换液，以后每隔3d换液，长满后传代，