斜带石斑鱼四种生肌调节因子基因的cdna克隆及其表达模式分析

《斜带石斑鱼四种生肌调节因子基因的cdna克隆及其表达模式分析》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、中山大学硕士学位论文斜带石斑鱼四种生肌调节因子基因的cDNA克隆及其表达模式分析姓名：桑庆申请学位级别：硕士专业：水生生物学指导教师：林浩然20100608桑厌中山大学硕十学位论文2010年6月斜带石斑鱼四种生肌调节因子基因的cDNA克隆及其表达模式分析专业：水生生物学硕士生：桑庆导师：林浩然院士摘要MyoD，Myogenin,Myf5和MRF4是生肌调节因子(Myogenicregulatoryfactors，MRFs)家族的成员，其功能区都具有碱性螺旋．环．螺旋结构域(basichelix-loop·helix,bHLH)，即一个螺旋-

2、环-螺旋基序(helix-loop—helixmotif)及其上游的富含碱性氨基酸序列(basicregion)。生肌调节因子蛋白以同源或异源二聚体形式与DNA上E．box序列(CANNTG)结合而启动下游肌肉相关基因(如肌球蛋白轻链)的转录。鱼类的生长主要体现在体重的增加，体重的增加主要取决于肌肉生长的速度，生肌调节因子作为一种转录因子在肌肉的生成过程中发挥重要作用。本研究克隆了斜带石斑鱼四种生肌调节因子MyoD，Myogenin,Myf5和MRF4的cDNA，分析了四种生肌调节因子在斜带石斑鱼各种组织以及胚胎发育不同时期的表达，并研究了

3、饥饿及再投喂对四种生肌调节因子的表达影响，主要结果如下：1在斜带石斑鱼中克隆得到了四种生肌调节因子(MyoD，Myogenin，Myf5和MRF4)的cDNA序列，通过氨基酸序列比对发现，四种生肌调节因子在bHLH功能区域都非常保守，该区域大约由60个氨基酸组成。进化树分析发现，斜带石斑鱼的四种生肌调节因子都与鱼类的相应基因聚在一起，同源性分析显示，MyoD和MRF4同源性较高，而MyoG和Myf5的同源性较高。2采用RT-PCR的方法研究了四种生肌调节因子在斜带石斑鱼14种组织的表达情况，研究结果显示，四种生肌调节因子主要分布在红肌和白肌

4、，在眼睛中都有微量表达，另外，MRF4和Myogenin在皮肤中也有少量表达。可以看出，桑庆f{I山大学硕士学位论文2010年6月四种生肌调节因子主要在肌肉中起作用。3采用实时荧光定量PCR的方法研究了四种生肌调节因子在斜带石斑鱼胚胎发育不同时期的表达情况，结果显示，四种生肌调节因子基本上都是在原肠胚期附近开始大量表达，其中，Myf5最先表达，随后是Myogenin,MRF4和MyoD，说明它们的表达存在时间差异。4采用实时荧光定量PCR的方法研究了饥饿及再投喂对斜带石斑鱼四种生肌调节因子的影响。结果显示，斜带石斑鱼在饥饿前三周体重明显下降

5、，再投喂后体重增加明显，并且相对体重增重率要高于对照组，表现出一定的补偿生长。MRF4的表达在饥饿第一周后就开始显著升高，而Myf5，MyoD和Myogenin在饥饿第三周后表达显著升高。再投喂一周，Myf5，MRF4和Myogenin的表达恢复到正常水平，而MyoD的表达仍然显著高于对照组，推测MyoD的高表达可能是再投喂后斜带石斑鱼出现补偿生长的一个原因。关键词：斜带石斑鱼，生肌调节因子，cDNA克隆，饥饿及再投喂，表达模式桑庆中山大学硕士学位论文2010年6月Molecularcloningandexpressionpatternso

6、ffourMRFsgenesIn0range—SpOttedgrouper,Eptnepheluscoioiaes●l一‘·-⋯Major：HydrobiologyName：QingSangSupervisor：．HaoranLin(Academician)AbstractMyoD，Myogenin，iyf5andMRF4arcmembersofmyogenicregulatoryfactors(MRFs)sharingasimilarbHLHdomain．ProteinsofMRFscanhomodimerizethemselvesorh

7、etrodimerizewithE-proteinsandthenbindtoE-box(CANNTG)atthepromoterregionfollowingdimerizationandactivatetranscriptionsofmanyskeletalmuscle-specificgenes．Growthoffishismainlyevaluatedbythegrowthrateofmusclewhichdeterminesthefinalbodyweight．Astranscriptionalfactors,iREsplayim

8、portantrolesintheprocesssofmuscledevelopment．StudytowardsthemcanhelpUSbetterunderstandthe